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etandy

铁虫 (初入文坛)

[求助] 我的测序结果显示多出一个碱基来 整个编码序列的碱基数就不是3的倍数了

各位虫虫,小弟刚涉及这方面的实验,将PCR产物连接了T载体,然后去测序,模板序列是783bp,测序结果多出一个碱基来,成了784bp了,我该怎么办
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-23 21:05:53
把峰图拿出来看,有的时候两个连续一样的碱基会测成三个峰,其中有一个是杂峰要去掉!
真相是最大的奢侈品
2楼2011-11-22 11:04:07
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etandy

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by etandy at 2011-11-21 23:58:36:
各位虫虫,小弟刚涉及这方面的实验,将PCR产物连接了T载体,然后去测序,模板序列是783bp,测序结果多出一个碱基来,成了784bp了,我该怎么办

下面是我的峰图,位置在128-130bp。明显是3个G,理应是2个G。

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  • 附件 1 : 11192602(PUCW1-SMNU1)M13F_F07.ab1
  • 2011-11-23 10:13:26, 305.54 K
  • 附件 2 : 11192603(PUCW1-SMNU2)M13F_G07.ab1
  • 2011-11-23 10:13:31, 299.31 K
3楼2011-11-23 10:15:36
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howbigpig

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-23 21:06:12
楼主有没有考虑多了一个碱基有可能是个inDel类型的SNP?
4楼2011-11-23 16:47:16
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

不想打击你,不过很有可能是PCR时产生突变了……
可以另外挑个单菌落,再测一次,正确了最好,如果还是这种情况,考虑下楼上的吧。
5楼2011-11-23 21:07:53
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