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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母基因敲除后用回补验证吗？
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luckydog52

木虫 (著名写手)

[交流] 酵母基因敲除后用回补验证吗？

酵母基因敲除后用回补验证吗？
用PCR介导的同源交换片段，敲除酵母基因后用不用回补基因验证啊？
如果用，怎么回补？谢谢啦
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1楼 2011-11-19 18:57:42
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★
luckydog52(金币+1):谢谢参与
luckydog52(金币+2): 2012-02-21 15:10:57
通过敲除来研究基因的功能，所谓的敲除不外乎有三种情况：1）单交换插入抗性基因使原基因失活；2）抗性基因双交换替换掉原基因；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect，所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系，做了会更好。
祝实验顺利！
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luckydog52
2楼2011-11-19 20:02:47
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凡子1985

银虫 (小有名气)
★
luckydog52(金币+1):谢谢参与
luckydog52(金币+2): 2012-02-21 15:11:18
不需要，我们课题组以及我知道的课题组，我们最常做的就是酵母基因缺失突变，一般都不做，只需设计引物检测就行
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3楼2011-11-19 22:40:59
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allmessup

铜虫 (初入文坛)
★
luckydog52(金币+1):谢谢参与
luckydog52(金币+2): 2012-02-21 15:10:45
引用回帖:
1楼: Originally posted by luckydog52 at 2011-11-19 18:57:42:
酵母基因敲除后用回补验证吗？
用PCR介导的同源交换片段，敲除酵母基因后用不用回补基因验证啊？
如果用，怎么回补？谢谢啦

我想是要的，如果这是用来发表的数据的话。
曾经遇到过送审的文章被reviewer要求补这个数据。
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4楼2011-11-20 00:01:25
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luckydog52

木虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by srlee at 2011-11-19 20:02:47:
通过敲除来研究基因的功能，所谓的敲除不外乎有三种情况：1）单交换插入抗性基因使原基因失活；2）抗性基因双交换替换掉原基因；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量 ...

谢谢 ！！！
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5楼2012-02-21 21:47:15
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luckydog52

木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by srlee at 2011-11-19 20:02:47:
通过敲除来研究基因的功能，所谓的敲除不外乎有三种情况：1）单交换插入抗性基因使原基因失活；2）抗性基因双交换替换掉原基因；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量 ...

请问 polar effect指的是什么？我不太懂。谢谢
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6楼2012-02-21 21:51:40
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lyyjackey

新虫 (小有名气)
★
luckydog52(金币+1): 谢谢参与
请问你长出转化子之后是怎么验证的呢?
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7楼2013-05-24 10:20:10
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luckydog52

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lyyjackey at 2013-05-24 10:20:10
请问你长出转化子之后是怎么验证的呢?

PCR 验证
四对引物
可以参考这个网页的内容，
http://www-sequence.stanford.edu ... esc.html#delconfirm
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8楼2013-05-28 23:11:57
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