24小时热门版块排行榜    

查看: 2715  |  回复: 7

luckydog52

木虫 (著名写手)


[交流] 酵母基因敲除后用回补验证吗?

酵母基因敲除后用回补验证吗?
用PCR介导的同源交换片段,敲除酵母基因后用不用回补基因验证啊?
如果用,怎么回补?谢谢啦
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

srlee

铁杆木虫 (小有名气)



luckydog52(金币+1):谢谢参与
luckydog52(金币+2): 2012-02-21 15:10:57
通过敲除来研究基因的功能,所谓的敲除不外乎有三种情况:1)单交换插入抗性基因使原基因失活;2)抗性基因双交换替换掉原基因;3)同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大,前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子,但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect,所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的,如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系,做了会更好。
祝实验顺利!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2011-11-19 20:02:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凡子1985

银虫 (小有名气)



luckydog52(金币+1):谢谢参与
luckydog52(金币+2): 2012-02-21 15:11:18
不需要,我们课题组以及我知道的课题组,我们最常做的就是酵母基因缺失突变,一般都不做,只需设计引物检测就行
3楼2011-11-19 22:40:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

allmessup

铜虫 (初入文坛)



luckydog52(金币+1):谢谢参与
luckydog52(金币+2): 2012-02-21 15:10:45
引用回帖:
1楼: Originally posted by luckydog52 at 2011-11-19 18:57:42:
酵母基因敲除后用回补验证吗?
用PCR介导的同源交换片段,敲除酵母基因后用不用回补基因验证啊?
如果用,怎么回补?谢谢啦

我想是要的,如果这是用来发表的数据的话。
曾经遇到过送审的文章被reviewer要求补这个数据。
4楼2011-11-20 00:01:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)


送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by srlee at 2011-11-19 20:02:47:
通过敲除来研究基因的功能,所谓的敲除不外乎有三种情况:1)单交换插入抗性基因使原基因失活;2)抗性基因双交换替换掉原基因;3)同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量 ...

谢谢 !!!
5楼2012-02-21 21:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)


引用回帖:
: Originally posted by srlee at 2011-11-19 20:02:47:
通过敲除来研究基因的功能,所谓的敲除不外乎有三种情况:1)单交换插入抗性基因使原基因失活;2)抗性基因双交换替换掉原基因;3)同框缺失即完整的使原基因敲除掉。
第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量 ...

请问 polar effect指的是什么?我不太懂。谢谢
6楼2012-02-21 21:51:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyyjackey

新虫 (小有名气)



luckydog52(金币+1): 谢谢参与
请问你长出转化子之后是怎么验证的呢?
7楼2013-05-24 10:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by lyyjackey at 2013-05-24 10:20:10
请问你长出转化子之后是怎么验证的呢?

PCR 验证
四对引物
可以参考这个网页的内容,
http://www-sequence.stanford.edu ... esc.html#delconfirm
8楼2013-05-28 23:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 luckydog52 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 323求调剂 +5 洼小桶 2026-03-18 5/250 2026-03-22 17:38 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中国石油大学(华东) 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂,总分315(英一) +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿中国海洋大学,生物学,301分,求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
信息提示
请填处理意见