24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1466  |  回复: 3
本帖产生 2 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, MolEPI+1): 鼓励积极应助! 2011-11-18 18:33:00
我只制备过大肠杆菌的感受态,楼主的步骤大的方向是这样的,但是小细节方面不知道注意没有:
1、楼主按1:50的比例稀释,而且培养了4h,这个时间是不是有点长了;之前我的比例是1:100的比例,培养的时间为2.5-3h,而且摇好后可立即放到冰上
2、感受态的制备过程均是在冰上操作的,楼主只洗了1次,我一般洗2两次,第一次10-15ml,第二次6ml,100mM的氯化钙,
3、最后每管悬浮于1ml的氯化钙中,分装之前先将离心管预冷一下,再进行分装。
2楼2011-11-18 09:15:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3, MolEPI+1): Good!鼓励分享!对楼主有帮助! 2011-11-19 18:44:24
一般的做法,转化后都会有个复苏过程,农杆菌这个可以加800uL YEB(无抗)培养基在1.5mL EP管里摇4-6个小时再涂板;大肠杆菌这个也可以复苏45分钟以后再涂板,可以一定程度提升转化率。
此外,我们的大肠杆菌对数期标准为OD550或者600等于0.4,不要超过这个数值,不然氯化钙法的转化率降低很多。氯化钙尽量使用含有结晶水的晶体新鲜配制,市售的无水氯化钙往往不是很纯。
收获菌体的那一步,降温要均匀迅速,我们一般在制冰机里摇震3角瓶。
How about the future?
4楼2011-11-19 16:32:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王玉民 的主题更新
信息提示
请填处理意见