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[交流]
有哪位高手western blotting做过MCF-7的cyclinB和cyclind1？ 已有2人参与
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| 我现在在做WB，细胞系是MCF-7R,但是跑过一次之后发现没有曝出条带来。。。因为提取蛋白的时候加裂解液体积大了一点 所以上样量只有10ug, 另外我的抗体是santa cruz的抗人cyclin B和cyclinD1的抗体，1:500稀释的 我想问下有人做过相关实验吗？我不知道这俩蛋白的表达量 是不是蛋白上样量太少了引起的条带出不来？或者有谁用过这家的两个抗体，稀释比例一般是多少呢？ 感谢大家帮忙解决~ |
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2楼2011-11-21 16:30:31
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+1): 鼓励应助 2011-11-23 17:51:59
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+1): 鼓励应助 2011-11-23 17:51:59
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我用过MCF-7，不过不是楼主做的蛋白~但是跟你遇到过同样的问题！santa和cell signaling technology的我都用了，明显cell signaling的好用...这样，你先确定二抗，是不是抗一抗来源的！我们这边有个小丫头就是做了好久，最后发现是二抗的问题...还有就是，我建议你用进口的显色剂，我曾经有3个月没做出条带，最后换了Pierce的显色剂，目的条带全出来了...说实话，楼主你的蛋白量确实太少了...我一般都要上60ug的... 一抗的稀释比例一般都是1：500-1:1000，应该不是楼主你稀释的问题~ |
3楼2011-11-23 15:58:43
