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小木木木虫铜虫 (小有名气)
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求解蛋白酶测定过程中滴加福林试剂出现沉淀，附详细过程~~~
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福林法测土壤蛋白酶，在加福林试剂显色后出现白色沉淀，用力摇动沉淀消失，但会产生很多小气泡，同时颜色也不是很透明，但在680nm下还算能测得出来 下面是详细的过程： 取1.00克土壤（< 2 mm）于大试管内。加入1ml pH为8.0的Tris-HCl缓冲液。用0.5ml甲苯盖盖处理15min。再加入2ml 1％的酪素溶液，将混合物仔细摇匀，橡胶塞封口，置于37 ℃恒温箱放置24h。与此同时，作不加基质（用2毫升缓冲液代替）的对照。培养结束后，加入3ml三氯醋酸溶液，摇匀，待沉淀完全过滤，除去沉淀。吸取1ml滤液于试管内，稀释一定量后加入5ml 0.4M的Na2CO3溶液，1ml Folin- Ciocalteu试剂，定容到25ml，充分摇匀后于37℃恒温箱中培养15min，显色充分后在680nm下比色。 我觉得这句话也有一定的启发~~~~~ 要注意的是，加入福林试剂时要特别小心，试剂只在酸性pH环境中才稳定，上述提到的还原反应只有在pH10时才发生，因此，福林试剂加入到碱性的Cu2+-蛋白质溶液中时，必须立刻搅拌，以使磷钼酸-磷钨酸试剂在未被破坏之前能有效地被Cu2+-蛋白质络合物所还原。 请教前辈们 谢啦 |
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小木木木虫
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2楼2011-11-10 16:04:27
