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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Promega SV提RNA
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xls198926

新虫 (初入文坛)

[交流] Promega SV提RNA 已有5人参与

大家好,想请教大家同样的问题,虽然 以前有很多人问过关于RNA提取的问题了, 我也看了,也在不断改进,可是出来的结果总是不理想,有时候好有时候不好,很不稳定,
虽然OD值都还好,但是跑出来的条带就是不清楚,降解仍然很严重,根本不能做下游实验,
有哪位虫虫也在用这个试剂盒的吗?能提点什么意见吗?特别是研磨这个过程,到底如何操作才能避免降解.具体过程中就注意什么呢.
求助迫切中.......
希望好人们赶紧告诉我吧...快被RNA整崩溃了......
因为是新手,所以金币不多呢.但真的希望大家帮帮忙.........
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1楼 2011-10-31 16:10:08
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分子生物化学

金虫 (小有名气)

实验菜鸟
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wanhscn(金币+4): 鼓励新虫发帖,多参加应助回帖有奖励! 2011-11-02 11:38:07
不一定要严格按照说明书来，有些时候是可以变通的，但是你必须要了解试剂盒的原理。
提RNA的时候要快，尽量避免RNA酶。要仔细检查你的实验过程，说不准你什么时候不注意就让整个实验失败了。
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做实验有失败才能学到东西
5楼2011-11-01 15:43:44
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xls198926

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 分子生物化学 at 2011-11-01 15:43:44:
不一定要严格按照说明书来，有些时候是可以变通的，但是你必须要了解试剂盒的原理。
提RNA的时候要快，尽量避免RNA酶。要仔细检查你的实验过程，说不准你什么时候不注意就让整个实验失败了。

嗯。你说得很对，我就是第一次做没看说明书，结果出来28和18S都不错，所以没想那么多就继续做，做第三次就不行了，跑胶的时候直接啥也没有，只能看到一团亮亮的东西，他们都说是降解，可是问题具体在哪里，师兄也不清楚，我们实验室才开始做这方面的。所以都不是很清楚。。。。我自己又差劲。。。只能和你们求助了呢。。。。谢谢你们哈。。。。
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7楼2011-11-01 21:50:26
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rodickholm

木虫 (正式写手)
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wanhscn(金币+2): 鼓励应助回帖! 2011-11-02 11:38:30
严格来说，比值OK就可以进行下游实验了，电泳有其他很多因素影响的，研磨就是快，尽量磨碎。组织要尽量新鲜。用得起SV提RNA，实验室不错啊。
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2楼2011-11-01 09:03:04
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xls198926

新虫 (初入文坛)
有时候跑出来就是这个样子。。。有时候也不会，问哈虫子们做实验会遇到这种情况吗？一下子可以，一下子不行的啊。。。。
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3楼2011-11-01 11:40:53
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jeff_jin

银虫 (小有名气)
★
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辛苦了！！！！！！
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4楼2011-11-01 14:30:35
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xls198926

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jeff_jin at 2011-11-01 14:30:35:
辛苦了！！！！！！

额。。。现在提RNA，大家存在的问题还多吗？互相交流一下么。。让我学习学习，想死的心都有了。。还有呢。OD值超过2.2是不是不好。？？？？？
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6楼2011-11-01 21:46:45
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xls198926

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by rodickholm at 2011-11-01 09:03:04:
严格来说，比值OK就可以进行下游实验了，电泳有其他很多因素影响的，研磨就是快，尽量磨碎。组织要尽量新鲜。用得起SV提RNA，实验室不错啊。

你好，今天我又跑了。不行。。。。还有OD值大于2.2，听说是不好的。是什么原因呢。。。。希望答复我一哈哦。。谢谢
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8楼2011-11-01 21:51:51
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xuj2007

木虫 (正式写手)
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wanhscn(金币+3): 鼓励应助回帖!应助更多有奖励! 2011-11-02 11:37:39
引用回帖:
8楼: Originally posted by xls198926 at 2011-11-01 21:51:51:
你好，今天我又跑了。不行。。。。还有OD值大于2.2，听说是不好的。是什么原因呢。。。。希望答复我一哈哦。。谢谢

OD=2.2的话，估计细菌都是死菌或者快死了。一般对数生长期最好。具体根据实验需要。
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9楼2011-11-01 22:53:38
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xls198926

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xuj2007 at 2011-11-01 22:53:38:
OD=2.2的话，估计细菌都是死菌或者快死了。一般对数生长期最好。具体根据实验需要。

额，我提的是叶螨。。。一种好小的虫子////
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10楼2011-11-02 10:29:33
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