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XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR一直扩不出目的条带

各位大虾你们好:我想问一下我最近跑pcr一直扩不出我的目的条带,我退后温度从49度到60度都跑过还是没结果,我的引物合成单上的这对引物其中一条引物的Tm值是52.74,一条Tm值是55.02,我跑pcr的程序是95度2min,94度40s,55度40s,72度40s,循环35个,72度10min,4度保存。我的体系是模板2ul,dntp1ul,引物各1ul,buffer5ul,Taq酶1ul,DDW39ul,共50ul的体系。我的模板是提取的重组质粒!各位高手给小妹指点一下吧!谢谢了!
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

质粒模板稀释100--1000倍后加1--5ul做模板,我这几次也这样,模板稀释后就扩出来了。另外检查下你的PCR试剂有没有问题
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
5楼2011-10-29 19:40:45
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

楼主的泳道里有弥散吗?质粒稀释多少倍?
jiayoubashaonian
2楼2011-10-28 22:29:33
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XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

有弥散,隐约能看到拖带现象,另外在700bp还有条带,但是我的条带大小是300bp多,质粒的浓度不没测过!但是提完质粒检测条带可亮!
3楼2011-10-29 15:33:16
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孙梦婧

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

touch-dowm pcr试一下
努力向前看
4楼2011-10-29 17:56:13
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