24小时热门版块排行榜    

查看: 3255  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR一直扩不出目的条带

各位大虾你们好:我想问一下我最近跑pcr一直扩不出我的目的条带,我退后温度从49度到60度都跑过还是没结果,我的引物合成单上的这对引物其中一条引物的Tm值是52.74,一条Tm值是55.02,我跑pcr的程序是95度2min,94度40s,55度40s,72度40s,循环35个,72度10min,4度保存。我的体系是模板2ul,dntp1ul,引物各1ul,buffer5ul,Taq酶1ul,DDW39ul,共50ul的体系。我的模板是提取的重组质粒!各位高手给小妹指点一下吧!谢谢了!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 PCR技术 分子生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhfge

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by imyting at 2011-10-29 20:19:32:
个人感觉不是体系的原因,我曾经遇到过N次这种情况,一次是因为两端引物浓度不一样造成的(看引物合成单上的OD值),一次是因为引物设计上有问题。楼主这个很明显退火温度已经不能再降了,已经出现非特异性扩增了 ...

50ul体系加1ul 酶倒不算太多;具体还要看看酶活或者使用时间。有的时候酶放的太久或者保存不当导致酶活下降,多加点倒也没什么的。
但是要是很高,酶加多了真的会导致非特异性扩增哦~~~这个是我亲身经历的~~~
10楼2011-10-30 18:29:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

楼主的泳道里有弥散吗?质粒稀释多少倍?
jiayoubashaonian
2楼2011-10-28 22:29:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

有弥散,隐约能看到拖带现象,另外在700bp还有条带,但是我的条带大小是300bp多,质粒的浓度不没测过!但是提完质粒检测条带可亮!
3楼2011-10-29 15:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙梦婧

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

touch-dowm pcr试一下
努力向前看
4楼2011-10-29 17:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见