24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2864  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

[求助] PCR一直扩不出目的条带

各位大虾你们好:我想问一下我最近跑pcr一直扩不出我的目的条带,我退后温度从49度到60度都跑过还是没结果,我的引物合成单上的这对引物其中一条引物的Tm值是52.74,一条Tm值是55.02,我跑pcr的程序是95度2min,94度40s,55度40s,72度40s,循环35个,72度10min,4度保存。我的体系是模板2ul,dntp1ul,引物各1ul,buffer5ul,Taq酶1ul,DDW39ul,共50ul的体系。我的模板是提取的重组质粒!各位高手给小妹指点一下吧!谢谢了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhfge

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by imyting at 2011-10-29 20:19:32:
个人感觉不是体系的原因,我曾经遇到过N次这种情况,一次是因为两端引物浓度不一样造成的(看引物合成单上的OD值),一次是因为引物设计上有问题。楼主这个很明显退火温度已经不能再降了,已经出现非特异性扩增了 ...

50ul体系加1ul 酶倒不算太多;具体还要看看酶活或者使用时间。有的时候酶放的太久或者保存不当导致酶活下降,多加点倒也没什么的。
但是要是很高,酶加多了真的会导致非特异性扩增哦~~~这个是我亲身经历的~~~
10楼2011-10-30 18:29:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

楼主的泳道里有弥散吗?质粒稀释多少倍?
jiayoubashaonian
2楼2011-10-28 22:29:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

有弥散,隐约能看到拖带现象,另外在700bp还有条带,但是我的条带大小是300bp多,质粒的浓度不没测过!但是提完质粒检测条带可亮!
3楼2011-10-29 15:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙梦婧

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

touch-dowm pcr试一下
努力向前看
4楼2011-10-29 17:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +21 积极向上; 2026-04-10 23/1150 2026-04-15 12:50 by 西北望—风沙
[考研] 367求调剂 +11 hffQAQ 2026-04-09 11/550 2026-04-14 17:48 by lhj2009
[考研] 335求调剂 +19 想上岸呀!! 2026-04-12 21/1050 2026-04-14 16:23 by Art1977
[考研] 一志愿085502,267分求调剂 +19 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 20/1000 2026-04-14 16:03 by zs92450
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 求调剂288 +7 ioodiiij 2026-04-10 9/450 2026-04-13 08:33 by Hayaay
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 296求调剂 +14 汪!?! 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 293求调剂 +6 勇远库爱314 2026-04-08 6/300 2026-04-11 10:08 by zhq0425
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 301求调剂 +5 149. 2026-04-10 5/250 2026-04-10 15:45 by 柴小白
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 083200 初试305分 求调剂 暂不考虑跨专业 +15 Claireyyyy 2026-04-09 15/750 2026-04-09 16:11 by zhuimr
[考研] 286求调剂 +19 Faune 2026-04-08 20/1000 2026-04-09 08:36 by 哦哦123
信息提示
请填处理意见