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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有什么方法能敲除一个基因中间的几个碱基，再克隆到载体上
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wendaojue

铜虫 (著名写手)

[求助] 有什么方法能敲除一个基因中间的几个碱基，再克隆到载体上

想搞一个突变，不知道怎么做，谢谢了！
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1楼 2011-10-11 11:19:58
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nanamaka

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

PCR突变，设计引物时把相应位置突变，突变位置不要设计在5'或3'，最好在中间位置，用高保真的KOD酶扩增，两轮反应就可以得到突变了。
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人生若只如初见
6楼2013-07-25 22:43:35
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

【答案】应助回帖

呵呵 在引物上面设计图片位点 用PCR的方法就可以了
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可以用QQ找我……
2楼2011-10-11 11:33:43
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yemuren

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主可参照《分子克隆实验指南》第三版 下册P1095页方案三，或者用 Quickchange II site-Directed Mutagenesis kit做，不难。
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我的专长叫做流浪，所以我就做了流氓~
3楼2011-10-11 14:17:15
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临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yemuren at 2011-10-11 14:17:15:
楼主可参照《分子克隆实验指南》第三版 下册P1095页方案三，或者用 Quickchange II site-Directed Mutagenesis kit做，不难。

重叠pcr可以，你可以看一下的
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4楼2011-10-11 14:24:42
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