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王玉民

新虫 (小有名气)

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[求助] 求助：请问做TOPO克隆时总是连接不上怎么回事啊？

请教高手：
我用Pfu酶扩增得到大约500bp的片段，与TOPO载体连接时，连接转化后总是不长斑是怎么回事啊？
有没有做过TOPO克隆的有什么好的经验指导一下啊？

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心晴

1楼 2011-10-11 09:25:09

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沙门小rna

金虫 (正式写手)

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专业: 病原细菌、细菌感染与宿主

【答案】应助回帖

引用回帖:

5楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-10-11 14:47:04
TOPO vector 是invitrogen公司的一个TA克隆的质粒载体系列。http://tools.invitrogen.com/content/sfs/manuals/topota_man.pdf
Pfu酶是高保真酶，扩增后不带A的，所以你扩增得到大约500bp的片段如果没有经过加A处 ...

这个问题，貌似我做过pfu直接连的。。。没验证出来。。后来加了rtaq酶。

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应助之星就是我~没错。你没有看错~

10楼2013-10-27 11:34:11

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