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faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 求帮忙分析下菌液PCR检测结果

各位同志,图是我挑选单克隆之后菌液PCR的结果,上半部分为一个基因大小2168bp,下半部分基因大小1527bp。从图上看,只有基因2只有2.5可能有目的条带,基因6中6.2.1-6.2.5均有1500bp左右片段,但亮度不够。最近的单克隆经常出现这种情况,要么亮度不够,要么不是目的条带,请各位大侠帮忙分析下出现这种情况的原因及可能的解决办法,不胜感激。
ps:连接的目的基因是通过PCR扩增、切胶回收得到,连接前电泳检测过,条带单一。
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faile18

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-09 21:09:06:
那是必然了,肯定能排除基因组的影响啊!特别是针对特异性不高的引物而言

你说的基因组的影响是指?我的引物确实特异性不够高
14楼2011-10-09 21:21:03
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wen19870427

新虫 (初入文坛)

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西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-08 21:29:45
检测基因6用的引物不够特异,重新设计引物
2楼2011-10-08 20:48:03
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

情况比较复杂,干脆提下质粒重新p下好了
3楼2011-10-08 21:12:01
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双鱼猫咪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-10-09 07:57:33
请问检测的用的是特异引物还是通用引物,如果是通用引物,P出来的片段会比目的片段稍大一点。菌液PCR本身假阳性就很高,最好用质粒PCR,结合酶切鉴定,会使成功率提高
5楼2011-10-08 21:55:48
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