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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 这样的质粒可用吗？
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fannyzehong

银虫 (初入文坛)

[求助] 这样的质粒可用吗？

新手提取质粒，用的是碱裂解法，不知道这样的质粒能用吗？提的是DH5a的质粒,插入了我的目的片段。怎样才能提取出质量更好的质粒？谢谢！
因为是新人，金币有限，请谅解！
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1楼 2011-10-08 16:36:40
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rhy1027

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

adslye(BioEPI+1): 鼓励交流~ 2011-10-08 19:16:52
fannyzehong(金币+4): 2011-10-09 09:57:06
从图上看你抽出来的质粒是正常的。一般抽出来的质粒图谱就不会是简单的一条比较sharp的带，插入目的基因的质粒会有三种形态，一种是双螺旋的，一种是环状的，还有线性的。至于鉴定，就需要你做酶切，或者PCR的，不能看着图谱不漂亮就说质粒质量不好，DH5a扩增质粒一般都没有问题的。
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2楼2011-10-08 16:49:10
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-10-08 19:17:03
fannyzehong(金币+1): 2011-10-10 17:09:14
质粒出三条带也算正常，线性的，双螺旋，以及超螺旋结构会使质粒出现多条带，要确认是不是你所需要的质粒最好酶切一下。
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hehe
3楼2011-10-08 17:41:59
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wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

总体来说，抽出来的质粒三条带很正常，没啥好担心的，用内切酶切一下就知道你的目的基因有没有连上了，不过你确定这是同一种质粒？？怎么大小不一致啊？？还有你的DNA marker是两万的还是两千的？？
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4楼2011-10-08 19:21:30
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看图是没大问题的，关键是否是你要的质粒，酶切验证下就知道了
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显微镜下的世界很精彩！
5楼2011-10-08 22:11:24
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fannyzehong

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by fannyzehong at 2011-10-08 16:36:40:
新手提取质粒，用的是碱裂解法，不知道这样的质粒能用吗？提的是DH5a的质粒,插入了我的目的片段。怎样才能提取出质量更好的质粒？谢谢！
因为是新人，金币有限，请谅解！

[eimg]f4/3b/1284449_131806267 ...

三种状态的质粒，哪种条带亮一些说明质量好一些呢？我用碱裂解法的质粒是最前面的带亮。而我用试剂盒提取时则中间的带亮。
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6楼2011-10-09 09:56:41
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fannyzehong

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wzqno at 2011-10-08 19:21:30:
总体来说，抽出来的质粒三条带很正常，没啥好担心的，用内切酶切一下就知道你的目的基因有没有连上了，不过你确定这是同一种质粒？？怎么大小不一致啊？？还有你的DNA marker是两万的还是两千的？？

目的条带不一样。一个泳道是一种质粒。marKer是8k的。
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7楼2011-10-09 09:59:00
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