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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 小提质粒的看过来
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)

[求助] 小提质粒的看过来

碱裂解法提质粒，做很长时间了，重现性很不好：同一天提质粒，上午能提出来，放四度后下午就不出结果了，想来应该是操作的原因吧。想请教一下各位虫友，溶液2加入后到底需要放置几分钟吗？这个问题感觉说法不一...
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1楼 2011-10-07 16:52:16
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youngker918

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
tianhuijuan(金币+5): 2011-10-07 21:28:00
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！！ 2011-10-08 19:11:43
一般五分钟以内吧，不要超过太多，不然会有gDNA污染的
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天才就怕不够天才，坏又不够坏，天天都想离开，却不知何处才能换骨脱胎
2楼2011-10-07 20:05:22
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流，祝顺利！ 2011-10-08 19:12:05
溶液2加进去要快速轻柔混合好后立即加溶液3吧……不能太久，要不然引入基因组DNA污染了
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显微镜下的世界很精彩！
3楼2011-10-07 21:24:27
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-07 21:24:27:
溶液2加进去要快速轻柔混合好后立即加溶液3吧……不能太久，要不然引入基因组DNA污染了

见过有说加后冰上放5min的，有的试剂盒的步骤好像也是要求静置一会儿。有点犯晕..
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4楼2011-10-07 21:27:37
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by tianhuijuan at 2011-10-07 21:27:37:
见过有说加后冰上放5min的，有的试剂盒的步骤好像也是要求静置一会儿。有点犯晕..

你那个试剂盒上面的要求是什么？一般来说加入溶液2后混合均匀就会出现蛋清状透明了就可以了，然后加入溶液3中和离心……
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tianhuijuan
显微镜下的世界很精彩！
5楼2011-10-07 21:30:38
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
tianhuijuan(金币+5): 2011-10-08 19:07:53
adslye(金币+2): 鼓励交流，祝顺利！ 2011-10-08 19:12:52
上午能出来，下午出不来的原因：

4度静止后，菌体沉淀在试管底部，你收集菌液时没完全倒出菌体，导致质粒量少
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tianhuijuan
6楼2011-10-07 21:41:45
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夏尔list

金虫 (著名写手)
按它写的步骤来应该不会错吧~提质粒有时候放个一晚或者一天在四度都没什么关系的
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7楼2011-10-08 13:41:42
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-07 21:30:38:
你那个试剂盒上面的要求是什么？一般来说加入溶液2后混合均匀就会出现蛋清状透明了就可以了，然后加入溶液3中和离心……

用的是北京鼎国的试剂盒，说温和反复颠倒混匀4-6次，室温放置5min...
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8楼2011-10-08 19:07:41
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
也见过有做时间对照的，说一周内提质粒变化不大。不清楚到我这里为啥就出状况了。
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9楼2011-10-08 19:09:51
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by yang0071 at 2011-10-07 21:41:45:
上午能出来，下午出不来的原因：

4度静止后，菌体沉淀在试管底部，你收集菌液时没完全倒出菌体，导致质粒量少

再少也不能一点都没有吧...
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10楼2011-10-08 19:16:57
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