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小LELE

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[求助] 关于Acetic Acid-Urea-PAGE配方的问题

第一次做Acetic Acid-Urea-PAGE,也没有找到更详细的资料,在试验中遇到很多问题,急求高手解答。
       附表WORD“Acetic Acid-Urea-PAGE”是我使用的凝胶配方。按照该方法进行试验,得到的是一块空白凝胶,凝胶上没有任何条带,想请您帮忙检查问题出在哪处?
       对该方法有几点不明白,寻求解答。
      (1)凝胶中尿素和冰醋酸的含量对试验有什么影响?
      (2)样品在进行SDS-PAGE试验时,使用的分离胶浓度为8%;在进行Acetic Acid-Urea-PAGE时使用7%的分离胶,蛋白是否有可能迁移出凝胶?   
      不知是否是以下两点问题影响了试验结果:(3)变性样品缓冲液使用溴酚蓝替代PyroninY,指示剂在含有盐酸的溶液中呈现棕黄色;电泳时,指示剂向下迁移,但是在加样孔边缘残留蓝色试剂(蓝色残留是否是蛋白?)。(4)电泳缓冲液中所含成分(是单一含有盐酸,还是同时含有盐酸和甘氨酸)。
        十分感谢。
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