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关于Acetic Acid-Urea-PAGE配方的问题
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第一次做Acetic Acid-Urea-PAGE，也没有找到更详细的资料，在试验中遇到很多问题，急求高手解答。 附表WORD“Acetic Acid-Urea-PAGE”是我使用的凝胶配方。按照该方法进行试验，得到的是一块空白凝胶，凝胶上没有任何条带，想请您帮忙检查问题出在哪处？ 对该方法有几点不明白，寻求解答。 （1）凝胶中尿素和冰醋酸的含量对试验有什么影响？ （2）样品在进行SDS-PAGE试验时，使用的分离胶浓度为8%；在进行Acetic Acid-Urea-PAGE时使用7%的分离胶，蛋白是否有可能迁移出凝胶？ 不知是否是以下两点问题影响了试验结果：（3）变性样品缓冲液使用溴酚蓝替代PyroninY，指示剂在含有盐酸的溶液中呈现棕黄色；电泳时，指示剂向下迁移，但是在加样孔边缘残留蓝色试剂（蓝色残留是否是蛋白？）。（4）电泳缓冲液中所含成分（是单一含有盐酸，还是同时含有盐酸和甘氨酸）。 十分感谢。 |
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