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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 请帮忙分析HPLC如何分离此两个物质
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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ygllong

木虫 (正式写手)

[求助] 请帮忙分析HPLC如何分离此两个物质

两个未知化合物，走液相半制备的，分析柱呈现未基线分离两个峰，做了35%乙腈等度，32-35%乙腈水梯度，甲醇梯度，色谱图都如此，分析都未达到较好分离，所以不敢再做制备分离，请大家帮忙应当进一步怎么做呢？因为要做制备分离，最好不要引入其他物质，谢谢
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心在路上
1楼 2011-10-05 21:28:20
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News

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

ygllong(金币+3): 非常感谢，但是我还要以此分析条件放大做制备，进样量会增大 2011-10-06 10:41:26
根据分离度的计算公式，想要增大分离度1、降低进样量，使峰变得窄些。进样量大，峰宽还容易拖尾。2、降低洗脱强度、你的流动相洗脱能力太强，两个峰一下都被洗出来了。
再者，我觉得你两个峰分的差不多了，分离效果还不好，可以换等强度的不同溶剂组成试试，例如把乙腈-水换为四氢呋喃-水。
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水滴石穿！！
2楼2011-10-05 21:36:00
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wzhai_yan

金虫 (正式写手)
我是来学习的
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既然都来了，那就这样吧！
3楼2011-10-05 22:28:49
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ygllong

木虫 (正式写手)
但是我的条件是为制备做准备的，进样量会增大，另外，我做了乙腈10%-35%，50min的梯度，这两个还是在34%左右时出峰，没有分开，所以还是请大家帮忙了，谢谢
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心在路上
4楼2011-10-06 10:44:28
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News

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

ygllong(金币+2): 谢谢 2011-10-08 18:00:12
制备一般不都用正向色谱吗？大多数情况分析用反向色谱，两个不一样啊。
做制备色谱当然进样量要大，峰分不开很正常，一般制备色谱只要能使目标产物的含量达到百分之八九十就不错了，然后再纯化。
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水滴石穿！！
5楼2011-10-06 12:29:06
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lj20099873

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

ygllong(金币+2): 谢谢 2011-10-08 18:00:25
1，减小极性梯度；2，更换有机相，换甲醇、乙醇试试；3，减小进样量，不超过0.3 μL。
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日出东海落西山
6楼2011-10-06 13:59:26
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ygllong

木虫 (正式写手)
谢谢，同时做了20-50%甲醇60min的梯度，还是分不开，因为要以此条件放大做制备，所以分析分不开制备肯定更差
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心在路上
7楼2011-10-08 14:15:50
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ygllong

木虫 (正式写手)
还在求助
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心在路上
8楼2011-10-08 18:00:49
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yan1984

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

加点挥发性的缓冲盐（如：碳酸氢铵或乙酸之类），再调节pH试试。
另外，问下你溶解样品用什么溶剂？
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9楼2011-10-09 14:36:03
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yqx1985

木虫 (著名写手)

云中仙

【答案】应助回帖

看样子，你的第一个峰拖尾还挺严重。所以加点酸再试试。如果能把第一个峰的拖尾抑制住了，那么这种分离度上制备应该可以了
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人面不知何时去，桃花依旧笑春风
10楼2011-10-13 13:05:46
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