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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 请帮忙分析HPLC如何分离此两个物质
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408851978

木虫 (著名写手)

道圣

【答案】应助回帖

不用梯度洗脱吧，简单的样品等度就行，加大有机相比例
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奋斗是金！
11楼2011-10-13 14:50:48
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chaoke

木虫 (正式写手)

金虫

【答案】应助回帖

根据化合物结构的相似程度选择合适的流动相。如果简单的甲醇（乙腈）水分不开，根据化合物结构选用离子对试剂。如若还不行，考虑采用正常色谱模式。固定相考虑硅胶或者NH2键合相，流动想用正己烷加异丙醇条件试试。
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我思故我在
12楼2011-10-13 16:05:24
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jianhuilcn

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

ygllong(金币+1): 谢谢 2011-10-21 12:35:58
色谱分不开，做制备是不可能的啦
你干脆就用10%~20%等比例来跑，时间长一点，看出不出峰，另外甲醇的洗脱能力比乙腈弱一点，还有同楼上的，第一个物质似乎有拖尾，加酸或者加缓冲盐吧，而且你这个到底是哪类物质也没有说。最后柱子长度是用250mm的吗？
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13楼2011-10-13 17:51:56
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muxiachuixue

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

ygllong(金币+2): 谢谢，1.5是杂质和溶剂峰一起出来的 2011-10-21 12:35:45
1.从楼主的峰来看，应该是15cm的柱子吧？你两个峰靠的太近了，估计15cm的柱子很难分开，你图中只有两个峰，个人觉得没必要走梯度，能走等度的时候最好走等度。
2.你用流动相溶解的样品吗？最好别用纯甲醇或者纯乙腈来溶解，否则会比较影响分离度（我的样品就是这样）。
3.首先，你可以加入0.1%的甲酸试试，可能会好一点。
4.改善分离度，从溶剂角度，只能慢慢降低改性剂的比例（但太低了会拖尾很厉害）。从你的描述来看，可以先试试30%的乙腈，然后每次降低5%，找到一个适合的范围，再微调，保证出峰时间不超过45min。乙腈不理想的话再试试甲醇-水等度。三元系统也可以试试。
5.有条件的话再试试改变柱温
6.请教你一个问题：你1.5min左右的峰是杂质吗？溶剂峰应该没这么高吧？我的样品也遇到过这样的问题，让我很头疼
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以无法为有法，以无限为有限
14楼2011-10-14 16:00:43
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