24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ygllong

木虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 7467.8
散金: 25
红花: 2
帖子: 555
在线: 795.9小时
虫号: 75664
注册: 2005-06-19
专业: 微生物资源与分类学

[求助] 请帮忙分析HPLC如何分离此两个物质

两个未知化合物，走液相半制备的，分析柱呈现未基线分离两个峰，做了35%乙腈等度，32-35%乙腈水梯度，甲醇梯度，色谱图都如此，分析都未达到较好分离，所以不敢再做制备分离，请大家帮忙应当进一步怎么做呢？因为要做制备分离，最好不要引入其他物质，谢谢

回复此楼

» 猜你喜欢

心在路上

1楼 2011-10-05 21:28:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

muxiachuixue

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2068.6
散金: 2
红花: 5
帖子: 315
在线: 178.7小时
虫号: 1285058
注册: 2011-05-04
性别: GG
专业: 合成药物化学

【答案】应助回帖

ygllong(金币+2): 谢谢，1.5是杂质和溶剂峰一起出来的 2011-10-21 12:35:45

1.从楼主的峰来看，应该是15cm的柱子吧？你两个峰靠的太近了，估计15cm的柱子很难分开，你图中只有两个峰，个人觉得没必要走梯度，能走等度的时候最好走等度。
2.你用流动相溶解的样品吗？最好别用纯甲醇或者纯乙腈来溶解，否则会比较影响分离度（我的样品就是这样）。
3.首先，你可以加入0.1%的甲酸试试，可能会好一点。
4.改善分离度，从溶剂角度，只能慢慢降低改性剂的比例（但太低了会拖尾很厉害）。从你的描述来看，可以先试试30%的乙腈，然后每次降低5%，找到一个适合的范围，再微调，保证出峰时间不超过45min。乙腈不理想的话再试试甲醇-水等度。三元系统也可以试试。
5.有条件的话再试试改变柱温
6.请教你一个问题：你1.5min左右的峰是杂质吗？溶剂峰应该没这么高吧？我的样品也遇到过这样的问题，让我很头疼