| 查看: 1809 | 回复: 1 | |||||
[交流]
质粒稳定性的策略 已有1人参与
|
|
1 质粒的选择：最好利用小的质粒 2 选择合适的插入片段或重新构建表达载体：插入DNA片断的大小，在质粒分离不稳定性中有关系；parDE基因的插入，可提高重组质粒稳定性。 3 选择适当的宿主细胞：同一宿主菌株对不同质粒的稳定性不同，而同一质粒在不同宿主菌株中的稳定性也有差别。 4 添加选择压力 在重组菌培养过程中通常采用增加“选择压力”来提高重组菌的稳定性。 “选择压力”通常包括：1)在质粒构建时，加入抗生素抗性基因，在生物反应器的培养基中加入抗 生素；2)利用营养缺陷型细胞作为宿主细胞，构建营养缺陷型互补质粒，设计营养缺陷型培养基；3)噬菌体抑制及转化子中自杀蛋白的表达。这种方法对于质粒或宿主细胞本身发生了突变，虽保留了选择性标记、但不能表达目的产物的细胞无效。 5 控制培养条件 5.1 培养基组成：葡萄糖、磷酸盐和无机盐是限制性基质(pBR325例外)； 5.2 氧传递和搅拌：温和的搅拌速率 5.3 温度和pH 温度敏感型质粒，常采用二阶段温度培养系统。重组工程菌的生长和产物合成时的pH值常不同。 5.4 选择合适的培养操作方式 1)适当采用周期性分批流加操作方式。另外，选择合适的流加方式可提高质粒在非选择性培养基中的稳定性和工程菌的产量。 2)连续培养的稀释速率周期变化时，周期的振幅和频率是质粒稳定性的重要参数。 3)固定化培养 生物一一四，生物导航之家。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验交流 | 你值得拥有 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有293人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 质粒构建
已经有13人回复
- 质粒稳定性的问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】请问各位，如何研究转化后质粒在宿主体内的稳定性？
已经有15人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌中蛋白表达量偏低，大家有什么建议？
已经有28人回复
- 生物学软件介绍及其下载地址【学生物的会很有用】
已经有24人回复
jinhx87
至尊木虫 (知名作家)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 28184.7
- 红花: 6
- 帖子: 6691
- 在线: 1213.2小时
- 虫号: 81315
- 注册: 2005-07-19
- 专业: 微生物遗传育种学
2楼2011-10-05 15:52:13
