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质粒稳定性的策略 已有1人参与
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1 质粒的选择：最好利用小的质粒 2 选择合适的插入片段或重新构建表达载体：插入DNA片断的大小，在质粒分离不稳定性中有关系；parDE基因的插入，可提高重组质粒稳定性。 3 选择适当的宿主细胞：同一宿主菌株对不同质粒的稳定性不同，而同一质粒在不同宿主菌株中的稳定性也有差别。 4 添加选择压力 在重组菌培养过程中通常采用增加“选择压力”来提高重组菌的稳定性。 “选择压力”通常包括：1)在质粒构建时，加入抗生素抗性基因，在生物反应器的培养基中加入抗 生素；2)利用营养缺陷型细胞作为宿主细胞，构建营养缺陷型互补质粒，设计营养缺陷型培养基；3)噬菌体抑制及转化子中自杀蛋白的表达。这种方法对于质粒或宿主细胞本身发生了突变，虽保留了选择性标记、但不能表达目的产物的细胞无效。 5 控制培养条件 5.1 培养基组成：葡萄糖、磷酸盐和无机盐是限制性基质(pBR325例外)； 5.2 氧传递和搅拌：温和的搅拌速率 5.3 温度和pH 温度敏感型质粒，常采用二阶段温度培养系统。重组工程菌的生长和产物合成时的pH值常不同。 5.4 选择合适的培养操作方式 1)适当采用周期性分批流加操作方式。另外，选择合适的流加方式可提高质粒在非选择性培养基中的稳定性和工程菌的产量。 2)连续培养的稀释速率周期变化时，周期的振幅和频率是质粒稳定性的重要参数。 3)固定化培养 生物一一四，生物导航之家。 |
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