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普通PCR基因组出现非特异性扩增带解决对策 已有1人参与
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PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。 1 原因 一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。 二是Mg2+离子浓度过高、 退火温度过低， 及PCR循环次数过多有关。 其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现， 酶量过多有时也会出现非特异性扩增。 2 对策 ①必要时重新设计引物。 ②减低酶量或调换另一来源的酶。 ③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。 ④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。 生物一一四 |
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