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酵母阳性转化子筛选
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| 利用pYES2转化后的酵母细胞，涂板在SD-url培养基上，菌落生长出来后，请问如何筛选其阳性的转化子呢？还是做PCR吗？以及为什么生长出来的菌落很少的呢？我用的是Invitrogen的easy transfromation Kit做的competent cell以及转化。基本上就只有20多个菌落，这样能筛选到阳性的吗？？ |
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5楼2011-09-23 23:38:16
2楼2011-09-23 11:24:34
xiemin217
木虫 (正式写手)
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3楼2011-09-23 17:33:41
yc652090251
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【答案】应助回帖
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amisking(金币+3): 鼓励应助。 2011-09-23 18:30:40
wangy0908(金币+5): xiexie 2011-09-23 21:05:04
wanhscn(金币+2): 鼓励多发贴交流，必要之时将授予专家指数！ 2011-09-24 08:51:40
wanhscn(金币+5, MolEPI+1): 根据近期表现，经决定，授予阁下专家指数一枚！祝国庆快乐！ 2011-10-03 11:14:05
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wangy0908(金币+5): xiexie 2011-09-23 21:05:04
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转化效率太低了，我是用电转的，转化效率很高，另外你的质粒浓度是不是不高啊，另感受态的OD很重要。 一个板20几个菌落的话，直接拿来做菌落PCR，鉴定为阳性的，直接小瓶表达就可以了。 建议先试着做下这几十个表达，同时提高转化效率再进行筛选表达。 |
4楼2011-09-23 17:57:34