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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » BCA求标准曲线（用过Pierce的BCA试剂盒的最好）
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athenawj

新虫 (初入文坛)

[交流] BCA求标准曲线（用过Pierce的BCA试剂盒的最好）

我用的是Pierce的BCA试剂盒，工作液A:B=50:1,200ul工作液加10微升不同浓度的BSA标准蛋白液（0.25,0.5,0.75,1.0,1.5,2.0mg/ml），因为建议稀释BSA时用与蛋白相同的溶液，就用了试剂盒中的的bufferA(细胞核和胞质蛋白提取试剂盒 )。得到的A562值分别为0.2934,0.6408,1.0168,1.1933,1.8290,2.2797
得到标准曲线y = 1.152x + 0.048
不过我怎么感觉不太对劲，那平常师姐测得蛋白562值0.3-0.5之间，岂不是浓度很小，也就是浓度小于0.5mg/ml
请问这样的曲线合适吗？
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1楼 2011-09-19 09:40:15
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elyn-yu

木虫 (初入文坛)
你用该还要加一个蛋白浓度为0的标准品，再做标准曲线。而且每次标准曲线不一定是一样的，总有不同。
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4楼2011-09-20 08:43:26
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athenawj

新虫 (初入文坛)
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2楼2011-09-19 20:06:49
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elyn-yu

木虫 (初入文坛)
★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-09-20 17:20:39
你的测得A562的值应该算正常的，看你标准品配的浓度范围的，我们最高浓度为2000ug/mL的，在37摄氏度孵育半个小时测得吸光度有1.7以上。你师姐是不是没孵育那么长时间啊，这样测出来的吸光度值都会偏小的。
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3楼2011-09-20 08:41:39
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girlfisher

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-09-20 17:20:51
你的标准曲线配错了1个数量级
Pierce BCA法的线性范围在5-250ug/ml
另外，吸光值超过1就不准了
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5楼2011-09-20 11:20:58
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athenawj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by girlfisher at 2011-09-20 11:20:58:
你的标准曲线配错了1个数量级
Pierce BCA法的线性范围在5-250ug/ml
另外，吸光值超过1就不准了

按照说明书配的呀，虽然说吸光度最好控制在0.8以内，线性度好些
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6楼2011-09-20 14:19:37
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girlfisher

金虫 (小有名气)
你用的是microplate reader还是分光光度计呢？
如果分光光度计的话值会比较大，而且你配的是说明书的后半段，线性度肯定不如前半段好
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7楼2011-09-20 14:31:08
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imfly77

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-09-20 17:21:17
按说明书配，没问题的。
测试时蛋白质样品需要进行稀释。
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8楼2011-09-20 14:52:59
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imfly77

木虫 (小有名气)
另外，BCA法的标准曲线不是直线，如果用直线拟合误差会比较大，建议你用多次曲线拟合。
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9楼2011-09-20 14:55:23
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athenawj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by girlfisher at 2011-09-20 14:31:08:
你用的是microplate reader还是分光光度计呢？
如果分光光度计的话值会比较大，而且你配的是说明书的后半段，线性度肯定不如前半段好

分光光度仪测得，我重复一下试试吧
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10楼2011-09-20 15:04:52
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athenawj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by athenawj at 2011-09-20 15:04:52:
分光光度仪测得，我重复一下试试吧

今天重复了一下，值还是没有减少一个数量级，我把提取的蛋白测了一下，依照标准曲线浓度可以达到1.8mg/ml
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11楼2011-09-20 18:51:52
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i羽翼深蓝i

新虫 (正式写手)
★
athenawj(金币+1): 谢谢参与
我的吸光度都在0.1左右，有关系么
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12楼2019-06-20 14:13:59
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
★
athenawj(金币+1): 谢谢参与
没什么问题呀，不知道你想问什么，这很正常啊！！！！！你师姐是否做了稀释呢？但是你做的一点问题都没有。
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13楼2019-06-20 15:56:37
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