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athenawj

新虫 (初入文坛)

[交流] BCA求标准曲线（用过Pierce的BCA试剂盒的最好）

我用的是Pierce的BCA试剂盒，工作液A:B=50:1,200ul工作液加10微升不同浓度的BSA标准蛋白液（0.25,0.5,0.75,1.0,1.5,2.0mg/ml），因为建议稀释BSA时用与蛋白相同的溶液，就用了试剂盒中的的bufferA(细胞核和胞质蛋白提取试剂盒 )。得到的A562值分别为0.2934,0.6408,1.0168,1.1933,1.8290,2.2797
得到标准曲线y = 1.152x + 0.048
不过我怎么感觉不太对劲，那平常师姐测得蛋白562值0.3-0.5之间，岂不是浓度很小，也就是浓度小于0.5mg/ml
请问这样的曲线合适吗？
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1楼 2011-09-19 09:40:15
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athenawj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by girlfisher at 2011-09-20 14:31:08:
你用的是microplate reader还是分光光度计呢？
如果分光光度计的话值会比较大，而且你配的是说明书的后半段，线性度肯定不如前半段好

分光光度仪测得，我重复一下试试吧
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10楼2011-09-20 15:04:52
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elyn-yu

木虫 (初入文坛)
★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-09-20 17:20:39
你的测得A562的值应该算正常的，看你标准品配的浓度范围的，我们最高浓度为2000ug/mL的，在37摄氏度孵育半个小时测得吸光度有1.7以上。你师姐是不是没孵育那么长时间啊，这样测出来的吸光度值都会偏小的。
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3楼2011-09-20 08:41:39
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elyn-yu

木虫 (初入文坛)
你用该还要加一个蛋白浓度为0的标准品，再做标准曲线。而且每次标准曲线不一定是一样的，总有不同。
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4楼2011-09-20 08:43:26
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girlfisher

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
athenawj(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-09-20 17:20:51
你的标准曲线配错了1个数量级
Pierce BCA法的线性范围在5-250ug/ml
另外，吸光值超过1就不准了
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5楼2011-09-20 11:20:58
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