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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 长序列（6.5k bp）基因的克隆
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xiuwei001

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 长序列（6.5k bp）基因的克隆

请问长序列（大约6500个bp）的基因如何克隆？采用什么试剂盒？

目前已知这个基因在烟草天蛾（一种虫子）的全序列，目的想克隆蚜虫里面的序列

[ Last edited by xiuwei001 on 2011-9-4 at 15:57 ]
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1楼2011-09-04 15:56:02
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 是啊，还是分成2到3段克隆比较好！ 2011-09-04 19:00:47
xiuwei001(金币+2): 谢谢 2011-09-04 19:18:33
扩增的序列有点长，建议分段扩增，减少因PCR扩增而引起的碱基突变的问题。
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3楼2011-09-04 16:39:36
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-09-04 19:00:09
xiuwei001(金币+3): 谢谢 2011-09-04 19:18:26
长片段克隆建议用Takara的高保真酶或是其他公司的，楼主可以向技术咨询一下，进行比较！另外，豌豆蚜虫的全基因组序列公布，不知楼主使用的是哪一种，楼主可否根据公布的序列设计引物来扩增！
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jiayoubashaonian
2楼2011-09-04 16:29:52
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 好建议 2011-09-05 07:47:25
一般的高保真的如KOD系列的应该都可以吧，如果你不放心的话，可以做搭桥，想搞多长久搞多长，呵呵！
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致良知
4楼2011-09-05 00:29:03
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