24小时热门版块排行榜    

查看: 3073  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Ag6501

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白酶基因表达,用的Bacillus subtilis系统,但总是表达不出,求高人指点…… 已有11人参与

最近在用Mo Bi Tec的WB800N菌株和pHT43载体这个系统做蛋白酶基因的表达,基因序列全部正确,方法是:1、将转化过的菌株过夜培养,37度,220rpm;2、取菌液100微升转接入新培养基,37度,220rpm,培养至OD600为0.7-0.8之间,加入IPTG使终浓度为1mM;3、继续培养,并让转速降一些,37度,3h;4、检测蛋白酶的表达。
    但始终没有检测到蛋白产物,求各位高人指点,究竟是哪里出了问题,谢谢!

真愁,哎~~~~
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

阳光倾城!
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ag6501

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 热心的应助! 2011-11-12 09:54:08
引用回帖:
6楼: Originally posted by speculiar at 2011-11-10 00:08:18:
请问用的是pHt43载体吗?我也在用。这个载体好像在枯草里是氯霉素抗性标记的,但我做的时候发现宿主本身就有氯霉素抗性。不知楼主有没有碰到这样的问题?
还想请教下楼主表达的是哪个家族的蛋白酶?S8?M4?
实 ...

我用的宿主载体不是氯霉素抗性的,所以用起来没有问题,你可以把抗性替换掉啊,我是表达一株铜绿假单胞菌的蛋白酶,
阳光倾城!
7楼2011-11-11 15:10:46
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

xbl3688

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
送鲜花一朵
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-11-08 11:29:25
1、你的表达菌株和表达载体都是枯草芽胞杆菌的,在这种菌里面表达本身的影响因素就很多,不能排除是芽胞杆菌本身的问题;
2、有的基因在某个载体上就是不表达,这个PHT43是穿梭载体吗,是的话可以先在大肠杆菌里边诱导试试
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
2楼2011-09-01 20:31:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ag6501

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xbl3688 at 2011-09-01 20:31:26:
1、你的表达菌株和表达载体都是枯草芽胞杆菌的,在这种菌里面表达本身的影响因素就很多,不能排除是芽胞杆菌本身的问题;
2、有的基因在某个载体上就是不表达,这个PHT43是穿梭载体吗,是的话可以先在大肠杆菌里 ...

是的,是穿梭载体,在大肠杆菌里表达了,就是没有活性。然后又换的这个枯草杆菌系统,结果就是测不到表达,难道是pH值?通氧?IPTG浓度?头大,,,想不明白了……谢谢回帖哦
阳光倾城!
3楼2011-09-08 17:22:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

speculiar

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
楼主,我也做蛋白酶,跟你遇到的问题一样。在大肠杆菌中有表达,但无活性。很崩溃
不知楼主现在进展如何?
4楼2011-11-08 10:25:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 5/250 2026-08-24 21:51 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 明天应该可查了!? +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见