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Ag6501

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白酶基因表达,用的Bacillus subtilis系统,但总是表达不出,求高人指点…… 已有11人参与

最近在用Mo Bi Tec的WB800N菌株和pHT43载体这个系统做蛋白酶基因的表达,基因序列全部正确,方法是:1、将转化过的菌株过夜培养,37度,220rpm;2、取菌液100微升转接入新培养基,37度,220rpm,培养至OD600为0.7-0.8之间,加入IPTG使终浓度为1mM;3、继续培养,并让转速降一些,37度,3h;4、检测蛋白酶的表达。
    但始终没有检测到蛋白产物,求各位高人指点,究竟是哪里出了问题,谢谢!

真愁,哎~~~~
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xbl3688

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
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wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-11-08 11:29:25
1、你的表达菌株和表达载体都是枯草芽胞杆菌的,在这种菌里面表达本身的影响因素就很多,不能排除是芽胞杆菌本身的问题;
2、有的基因在某个载体上就是不表达,这个PHT43是穿梭载体吗,是的话可以先在大肠杆菌里边诱导试试
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
2楼2011-09-01 20:31:26
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