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汕头大学海洋科学接受调剂
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lyqifeih

新虫 (小有名气)

[求助] PCR最短可以P多少bp，求大家帮我设计引物！

我是新手做PCR，以前是做电生理的，郁闷。现在要做PCR，PCR最短可以P多少bp啊，我需要P的越短越好！可以P 60bp、100bp么？求大家帮助。求大家帮我设计下面序列的引物，我主要的目的片段是红色部分。TTCAACTGTTGTTGCCTATTAAGAAACCTAATAAAGCTCCACCTTCTTTATCTCTGAAAGTGAACTCCCTGCTACCTTTGTGGACTGACAGCTTTTTATAGTCACGTGACACAGTCAAACATTAACTTGGTGTATCGATTGGTTTTTGCCATATATATATATATAAGTAGGAGAGGGCGAACCTCTGGCAGGAGCAAAGGCGCCATGGCTGTGGAGTCCCAGGGCGGACGCCCACTTGTCCTGGGCCTGCTGCTGTGTGTGCTGGGCCCAGTGGTGTCCCATGCTGGGAAGATACTGTTGATCCCAGTGGATGGCAGCCACTGGCTGAGCATGCTTGGGGCCATCCAGCAGCTGCAGCAGAGGGGACATGAAATAGTTGTCCTAGCACCTGACGCCTCGTTGTACATCAGAGACGGAGCATTTTACACCTTGAAGACGTACCCTGTGCCATTCCAAAGGGAGGATGTGAAAGAGTC
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刚进入神经生物和电生理
1楼 2011-08-26 13:51:41
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

lyqifeih(金币+1): 多谢提供建议 2011-08-26 14:05:07
去合成吧，便宜，takara的600左右
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2楼2011-08-26 13:55:56
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

lyqifeih(金币+1): 多谢！PCR最短可以P多少bp？ 2011-08-26 14:05:46
就这么短干脆合成好了，挺快的也不贵
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3楼2011-08-26 14:02:53
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lyqifeih

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aayqaa at 2011-08-26 14:02:53:
就这么短干脆合成好了，挺快的也不贵

我要的就是从样品DNA P出来啊，我合成了做了实验，现在需要P样品。 求大家帮忙！！
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刚进入神经生物和电生理
4楼2011-08-26 14:04:35
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roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

lyqifeih(金币+6): 帮我设计一对引物好不，红色标记的是需要的条带，80bp的！非常感谢！ 2011-08-26 15:11:45
两边设计两个酶切位点。大量P出来以后，用酶切的方法来获得，不知道可行不可行。80bp的P过没问题。
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5楼2011-08-26 14:22:21
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good 2011-08-26 17:49:43
lyqifeih(金币+5): 2011-08-26 19:36:40
lyqifeih(金币+5): 2011-09-01 13:18:54
如果你只是证明一下这段序列是否存在的话可以扩完PCR产物后直接取测序验证，由于目前测序技术的限制，从测序引物3‘端最后一个引物开始测的前60bp一般是不可信的（有些测序公司做的不错，20bp以后就可信了，不过为了保证可信度请按60bp来算），所以你扩增的最短的PCR产物应该为：2条引物的长度+60*2+目的条带长度约为200bp！
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2011-08-26 17:32:54
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shuihaizi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-08-26 18:21:08
lyqifeih(金币+2): 多谢！ 2011-08-26 19:33:01
100bpPCR是可以做的，我做过90bp的，不难P；60bp不清楚。
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7楼2011-08-26 18:13:39
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hexiaotian

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
675137楼: Originally posted by roomofxw at 2011-08-26 14:22:21
两边设计两个酶切位点。大量P出来以后，用酶切的方法来获得，不知道可行不可行。80bp的P过没问题。

我扩增120bp的目的基因一直p不出来，请问下你当时用的是什么酶，以及反应体系和pcr条件，谢谢！ 我邮箱hexiaotian89@126.com  十分
感谢！
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8楼2012-10-21 16:25:46
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