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酵母重组子筛选引物问题
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| 见论坛里提及筛选重组子的引物有的说用专用检测引物，有的说一条用特异性引物一条用专用引物。若是一条专用引物和一条特异性引物，但是这两者的引物长度差近10个碱基。退火温度也相差好远，能批吗，到底是什么样的情况呢，谢谢大家了 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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3楼2011-08-19 17:10:45
lxj341401
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2楼2011-08-19 13:58:46
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4楼2011-08-19 21:13:09
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+4, MolEPI+1): 经验很多啊 2011-08-19 23:25:01
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西瓜(金币+4, MolEPI+1): 经验很多啊 2011-08-19 23:25:03
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你可以用煮-冻-煮方法试试，很多人说比较简单的。 煮-冻-煮法：将1mL菌液2 500 X g离心5 min,弃上清，沉淀中加入500 uL TE悬浮沉淀，2500Xg离心3m in;弃上清，重复一次，最后沉淀溶于100 uLTE,沸水浴10 min，-20℃冷冻30 min,再次沸水浴10 min, 1 500 X g离心5 min,取上清为模板作PCR。 |
5楼2011-08-19 21:15:30