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银虫 (小有名气)

[求助] 酵母重组子筛选引物问题

见论坛里提及筛选重组子的引物有的说用专用检测引物，有的说一条用特异性引物一条用专用引物。若是一条专用引物和一条特异性引物，但是这两者的引物长度差近10个碱基。退火温度也相差好远，能批吗，到底是什么样的情况呢，谢谢大家了

1楼 2011-08-19 11:31:30

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至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:

4楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-08-19 21:13:09:
酵母做菌落PCR很难的，一般提取基因组DNA做模板。

不难吧，我觉的挺简单吧，虽然我不常做，但是做过的有限几次还真没有失手过

6楼2011-08-19 23:39:24

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至尊木虫 (职业作家)

模板制做方法：
1.取40ul无菌水于1.5ml Ep管中
2.牙签轻点单菌落，然后在无菌水中刷几下
3.Ep管盖了盖子，沸水浴5分钟
4.1200rpm离心2min，上清即是模板，20ul的pcr体系使用4ul做模板
以上方法做过有限的几次都没有失手过

7楼2011-08-19 23:45:42

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