24小时热门版块排行榜    

查看: 2483  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wzhgaochuan

新虫 (小有名气)

[求助] 玉米转基因植株的检测中遇到的问题

最近一直在做玉米转基因植株的检测,但是总也没有目的带。想知道是怎么做的,基因组有什么要求OD260: OD280为多少,多少纳克。具体的体系等等,我的引物最适合退火为53度。目的基因1400bp.
麻烦大家帮一下忙啊,急着要毕业,要是出不来结果会被延期啊~~·
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

选插入序列的一段用来作为靶片段,这个片段一般是玉米基因组中本身没有的。例如如果使用玉米的ubi启动子,就不能针对ubi启动子设计引物,而要根据ubi启动的后半段序列加上插入编码区(或RNAi茎环的茎区)前半段,约在400-600bp的靶片段设计引物。产物要避开诸如RNAi的茎环结构区。退火温度可以通过实验确定。
How about the future?
4楼2011-08-12 11:44:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wzhgaochuan(金币+2): 谢谢您的回答啦,受益匪浅,希望试验能出来。 2011-08-12 15:49:36
写的太不详细了。是自己做的转基因植株的验证,还是市面上买来的玉米面的转基因检测?不管哪种,都不该用1.4k的检测pcr,太长了,300-500还差不多。直接从叶片提基因组比较简单,用于做pcr模板的话,质量要求不是那么高。建议多了解一下转基因的插入序列,只选目的基因的一段用来做pcr,只要这一段是野生型玉米里面没有的就行。
How about the future?
2楼2011-08-12 09:31:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzhgaochuan

新虫 (小有名气)

我的是自己的转基因材料检测,就是从叶片中提取的基因组,不过浓度不高30ng/ul。插入的目的基因全长2.4K。那应该怎么设计体系呢?还有退火温度。按照PP5中的Ta Opt值吗?谢谢了
3楼2011-08-12 10:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邓远洪dyh

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

DNA的OD260:OD280在1.6到1.8之间为正常,高于这个值说明有RNA污染,低于这个值说明有蛋白质,酚类的污染。转基因的验证一般可以通过目的基因的PCR检测、southern杂交等进行检测。一般一个OD260相当于0.5微克每微升DNA。
5楼2011-08-12 15:05:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 科研孤儿太难了 +10 我4大白菜 2026-08-20 10/500 2026-08-20 20:04 by littlezl
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见