应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE电泳求助
61/1返回列表
查看: 2515  |  回复: 13
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

韩俊

金虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE电泳求助

跑了几次电泳 ，跑出来的胶，总是靠近上样一段没有条带，下面又有显示了，而且Mark也只有5条（应该有六条），最高分子量（97.4）的条带不见了。有人跟我说是灌注分离胶后，液封的时候，吧上层的分离胶稀释了，所以高分子量就没有分开，造成上层一块没有条带。

可是液封时候我已经非常小心了，希望各位帮帮忙，分析分析原因，小弟不甚感激。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-11 22:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 学习了！ 2011-08-13 15:46:36
韩俊(金币+4): 谢谢你的详细解答，受教了 2011-08-14 12:58:39
蛋白质电泳影响因素非常多，我也提供一个想法，前提是你的各种药品都没有问题，尤其是APS和TEMED，这两个是导致胶凝固快慢的决定因素。
因为看到你整块胶都明显有染色颜色了，我想，可能与你的胶不均匀有关系，也就是说你下面的凝固得很快，但是上面的没有凝，导致胶不均匀。由此形成的孔径大小就不均匀，所以有些条带没有分开。一般凝胶是20~30分钟比较理想，我之前也搞得很晕，超过40分钟往往胶就不均匀，跑出来的带歪歪扭扭，有时也出现没有条带，凝胶时间太长不仅会影响均匀性，甚至连网孔都无法形成，丙烯酰胺→聚丙烯酰胺是形成网孔的过程。
如果你怀疑是液封的影响，你不妨做个试验，即不液封，因为液封只是为了使分离胶与积层胶之间的界限凭证，以保证跑出来的条带是直线的（各样同时向前）。
赞一下(1人) 回复此楼
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
8楼2011-08-13 14:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

不液封并不会影响条带的数目，因此，可以试试。
赞一下 回复此楼
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
9楼2011-08-13 14:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 韩俊 at 2011-08-14 13:38:45:
求教两个问题
1.那怎么样防止这个不均匀呢？
2.经常倒分离胶的时候会在小烧杯里剩下一点，但是往往板里的已经凝结了，不过小烧杯里的还是不凝结，这是为什么？

如果你的胶凝得很快，说明你的催化剂还是没有失效的，也有可能你加了太多，加了太多也会导致胶太硬，跑时往往容易烧胶，板里的分部比较均匀，凝得快是自然的（比较平，散得比较开）。这个与你的胶不均匀无关。
很多实验室的DNA胶都是回收利用的，用久了自然杂质也多，不知道你们是是否这样，如果不是的话，你可以摇匀点，加的时候快点，也尽量让胶出于一个水平面，高低不同的话，浓度自然不同，就不均匀了。
我觉得你花几天去摸索一下吧，把认为比较可能的原因做个实验。磨刀不误砍柴工啊
赞一下 回复此楼
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
11楼2011-08-14 19:37:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

416114799

至尊木虫 (知名作家)
不好意思，另一个人是DNA电泳胶，我也回答了，搞错了，重新说明一下。
还是那个意思，你先做个不液封的试试，看看是否有稀释的可能。
至于如何做到均匀，这个得靠自己的经验去摸索，别人说的其实都只是理论而已，与实际还是有差距的。
①、如果是用bio-rad，一般卡板比较好解决问题，这个卡板过程一般不导致不均匀；但是如果是国产的，比如六一牌电泳仪，那卡板就很关键了，卡不紧会漏胶，太紧了就会导致两边的胶比中间的薄，自然就不均匀了，所以这个比较难办；
②、尽量在温度高一些时凝胶，温度太低，凝得就慢，分子运动自然会导致不均匀；
③、保证药品的有效性，特别是APS，包括国药牌的，其实质量都一样，最好按量分装，比如10%的APS，你可以称0.5g或1gAPS分装于小离心管中，要用时随时配，一定要干燥保存；
只要克服了以上问题，一般是可以解决的
赞一下 回复此楼
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
12楼2011-08-14 19:53:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

我自己在做的时候就发现，胶不均匀影响非常大的，另外，跑时不要把电压调太低或太高，太低了无法分离，太高了容易烧胶。往往是先调低一些，比如120V，10min，让条带聚在一起，然后调到150V，这样出来的条带就非常细，非常漂亮。电压不稳定容易导致拖带，甚至笑脸等
赞一下 回复此楼
做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
13楼2011-08-14 19:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 韩俊 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭