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韩俊

金虫 (正式写手)

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[求助] SDS-PAGE电泳求助

跑了几次电泳，跑出来的胶，总是靠近上样一段没有条带，下面又有显示了，而且Mark也只有5条（应该有六条），最高分子量（97.4）的条带不见了。有人跟我说是灌注分离胶后，液封的时候，吧上层的分离胶稀释了，所以高分子量就没有分开，造成上层一块没有条带。

可是液封时候我已经非常小心了，希望各位帮帮忙，分析分析原因，小弟不甚感激。

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1楼2011-08-11 22:50:51

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至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 学习了！ 2011-08-13 15:46:36
韩俊(金币+4): 谢谢你的详细解答，受教了 2011-08-14 12:58:39

蛋白质电泳影响因素非常多，我也提供一个想法，前提是你的各种药品都没有问题，尤其是APS和TEMED，这两个是导致胶凝固快慢的决定因素。
因为看到你整块胶都明显有染色颜色了，我想，可能与你的胶不均匀有关系，也就是说你下面的凝固得很快，但是上面的没有凝，导致胶不均匀。由此形成的孔径大小就不均匀，所以有些条带没有分开。一般凝胶是20~30分钟比较理想，我之前也搞得很晕，超过40分钟往往胶就不均匀，跑出来的带歪歪扭扭，有时也出现没有条带，凝胶时间太长不仅会影响均匀性，甚至连网孔都无法形成，丙烯酰胺→聚丙烯酰胺是形成网孔的过程。
如果你怀疑是液封的影响，你不妨做个试验，即不液封，因为液封只是为了使分离胶与积层胶之间的界限凭证，以保证跑出来的条带是直线的（各样同时向前）。