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韩俊

金虫 (正式写手)

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[求助] SDS-PAGE电泳求助

跑了几次电泳，跑出来的胶，总是靠近上样一段没有条带，下面又有显示了，而且Mark也只有5条（应该有六条），最高分子量（97.4）的条带不见了。有人跟我说是灌注分离胶后，液封的时候，吧上层的分离胶稀释了，所以高分子量就没有分开，造成上层一块没有条带。

可是液封时候我已经非常小心了，希望各位帮帮忙，分析分析原因，小弟不甚感激。

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1楼2011-08-11 22:50:51

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416114799

至尊木虫 (知名作家)

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专业: 环境微生物学

不好意思，另一个人是DNA电泳胶，我也回答了，搞错了，重新说明一下。
还是那个意思，你先做个不液封的试试，看看是否有稀释的可能。
至于如何做到均匀，这个得靠自己的经验去摸索，别人说的其实都只是理论而已，与实际还是有差距的。
①、如果是用bio-rad，一般卡板比较好解决问题，这个卡板过程一般不导致不均匀；但是如果是国产的，比如六一牌电泳仪，那卡板就很关键了，卡不紧会漏胶，太紧了就会导致两边的胶比中间的薄，自然就不均匀了，所以这个比较难办；
②、尽量在温度高一些时凝胶，温度太低，凝得就慢，分子运动自然会导致不均匀；
③、保证药品的有效性，特别是APS，包括国药牌的，其实质量都一样，最好按量分装，比如10%的APS，你可以称0.5g或1gAPS分装于小离心管中，要用时随时配，一定要干燥保存；
只要克服了以上问题，一般是可以解决的