| 查看: 2577 | 回复: 9 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
12zhangwei新虫 (小有名气)
|
[求助]
提出来是一回事，提得好是另外一回事-----RNA
|
||||
|
心哇凉哇凉地，电泳检测RNA条带是好的，可是测完吸光值之后，才明白又得从头再来。提了五个样 浓度(ng/ul) A260/A280 51.3 1.4 36.9 1.28 57. 1 1.34 56.8 1.3 25.1 1.35 仅拿出一个样来说，其A260=0.628 A280=0.466 A260/230=0.44 知道这些值的意义，是蛋白污染吗，取上清已经很小心了，别人说烟草的浓度差不多应该在1000多。唉 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 载体构建 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有117人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Promega SV提RNA
已经有10人回复
- 提DNA的过程中要是RNA没除尽是不是PCR出来的电泳结果会拖带？？
已经有7人回复
- 【求助/交流】提总的RNA的试剂是RNAiso效果好还是Trizol效果好
已经有31人回复
- 【求助/交流】提血液RNA浓度很低，怎样使其浓度高从而用于反转录
已经有16人回复
- 【求助/交流】如果提RNA的样品（叶片）有点降解，如何补救（尽量可以反转出CDNA）？
已经有5人回复
- 【求助/交流】试剂盒提不出RNA，求救啊
已经有39人回复
- 【求助/交流】要提棉花RNA了 想知道哪种方法更好
已经有6人回复
- 【求助/交流】RNA提的不好，基本都降解的话，逆转录后再PCR会是什么结果？
已经有20人回复
gwbk
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 54
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2293.5
- 红花: 24
- 帖子: 529
- 在线: 186.9小时
- 虫号: 1320681
- 注册: 2011-06-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good 2011-08-10 23:19:30
12zhangwei(金币+1): 2011-08-11 09:01:55
西瓜(金币+2): 代楼主发 2011-08-13 00:28:07
西瓜(金币+3): Good 2011-08-10 23:19:30
12zhangwei(金币+1): 2011-08-11 09:01:55
西瓜(金币+2): 代楼主发 2011-08-13 00:28:07
|
1，“分子克隆”第三版有下面两段话： DNA 和 RNA 纯制品的 OD260:OD280 值分别是 1.8 和 2.0，若样品中蛋白或酚的污染较严重，则 OD260:OD280 低于上述两个数值 (p1695 倒数第 5 行)。水饱和酚在 270nm 处有特征性吸收，其 OD260:OD280（此处疑似为270:280，原因参见：http://www.med66.com/html/ziliao ... ecd07108a85983f.htm） 比值为 2 (p1697 的框内倒数第 2 行)。 2，260nm、230nm、下的吸光度分别代表了核酸、盐浓度的吸光度值，OD260/OD230<2说明去盐不充分，可以再次沉淀和70%乙醇洗涤。 ，A230nm处有强吸收，有酚盐离子、硫氰酸盐或者其他有机化合物污染（分子克隆：p1697）OD260/230 大大低于 2，但 OD260，OD280 几乎不变。 3，样品中A260/A280低于2，A260/A230也低于2.0，可能存在蛋白质污染、盐离子没有除干净等问题。 4，关于A260/A280判断纯度的正确性问题。 通常，使用 A260/A280 判断核酸的纯度。A260/A280 是一个给大家带来许多困惑的指标。以RNA为例，首先要明确该指标用于核酸的原始含义是：纯的 RNA，其 A260/A280 = 2.0 左右。纯 RNA 是‘因’，A260/A280 = 2 是‘果’。现在大家却在拿 A260/A280 当‘因’用，认为“如果 A260/A280 = 2，所以 RNA 是纯的”，自然会产生困惑。有兴趣的话，可以在你的 RNA 样品中加入一点抽提中经常使用的试剂，如苯酚，异硫氰酸胍，PEG 等，再测 A260/A280 比值。现实是，许多抽提 RNA 时使用的试剂，以及样品中的许多杂质都在 A260 和 A280 处附近有吸收，对 A260/A280 产生影响。 目前最具有指导性的做法是：对 RNA 样品在 200-300 nm 范围扫描。纯 RNA 的曲线具有如下特点：曲线平滑，A230 和 A260 是两个拐点，A300 接近 0，A260/A280 = 2 左右，A260/A230 = 2 左右，A260/A215 = 1 左右。如果没有扫描数据，除了测定 A260/A280 比值外，也一定要测定 A260/A230 比值，因为该比值对所有影响酶反应的杂质的残留更敏感。另外，要考虑设备的线形范围 (如 A260 要处于 0.1 - 0.5 之间)，超出线形范围的读数没有太大参考价值的。另外有两个有趣的现象：在水中测定 A260/A280，比值将变低 0.3 左右；而在 10mM EDTA 中测定的比值比在 1mM EDTA 中测定的高 0.2 左右。这两点也是要注意的，所以当我们用DEPC处理过的水溶解RNA并测定其260/280比值的时候，往往都是小于2.0的。 此段来源于：http://blog.163.com/qcp_0451/blog/static/13604755520100254040361/ |
2楼2011-08-10 22:52:06
w2boluo
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 4
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2006.6
- 红花: 1
- 帖子: 85
- 在线: 356.3小时
- 虫号: 1083233
- 注册: 2010-08-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生殖生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 很有经验啊！ 2011-08-10 23:19:16
西瓜(金币+2): 代楼主发 2011-08-13 00:28:27
西瓜(金币+4): 很有经验啊！ 2011-08-10 23:19:16
西瓜(金币+2): 代楼主发 2011-08-13 00:28:27
|
你用的比色杯是多少微升的？这个很关键。 一般而言，我们用的紫外分光光度计的读数只有在OD值0.1到1之间才比较准，低于0.1或者高于1，都要打折扣。电泳图片好才是真的好。 我用过的杯子50ul的塑料杯，比较准，100ul的石英杯是不折不扣的杯具，读数任何时候都在乱跳。了解一下别人的OD值指标如何也行。 但多数时刻，我们提的RNA由于体积不够，都必须稀释，稀释后的吸光度必须落在0.1到1之间。如果电泳图片好，我选择无视吸光度，直接反转录。 |
3楼2011-08-10 22:53:15
gwbk
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 54
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2293.5
- 红花: 24
- 帖子: 529
- 在线: 186.9小时
- 虫号: 1320681
- 注册: 2011-06-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2011-08-10 23:03:08
gwbk
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 54
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2293.5
- 红花: 24
- 帖子: 529
- 在线: 186.9小时
- 虫号: 1320681
- 注册: 2011-06-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2011-08-11 00:03:14
12zhangwei
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 224.1
- 帖子: 65
- 在线: 20.7小时
- 虫号: 777006
- 注册: 2009-05-22
- 专业: 生物化学
6楼2011-08-11 09:50:05
gwbk
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 54
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2293.5
- 红花: 24
- 帖子: 529
- 在线: 186.9小时
- 虫号: 1320681
- 注册: 2011-06-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
7楼2011-08-11 10:34:48
12zhangwei
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 224.1
- 帖子: 65
- 在线: 20.7小时
- 虫号: 777006
- 注册: 2009-05-22
- 专业: 生物化学
西瓜8楼2011-08-13 00:15:53
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
9楼2011-08-13 00:31:14
qingyuansw20
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 4
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 382.5
- 散金: 21
- 红花: 3
- 帖子: 217
- 在线: 67.2小时
- 虫号: 1050181
- 注册: 2010-07-01
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
10楼2011-08-13 09:32:27
投票:
30