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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 建基因文库是为什么？弱弱的问一下，新手
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longage.gene

银虫 (小有名气)

[求助] 建基因文库是为什么？弱弱的问一下，新手

建基因文库是为什么？要取基因的话，直接提取全dna后pcr不就行了？
新手，别笑，望答案
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1楼 2011-08-04 17:49:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-05 08:04:35
你说的是知道基因序列或者至少知道两端的序列的情况了。序列的任何信息都不知道的情况下用PCR你怎么设计引物，怎么去扩增这个基因？
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3楼2011-08-04 19:47:36
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): good 2011-08-05 08:04:51
longage.gene(金币+2): 2011-08-05 09:09:47
引用回帖:
1楼: Originally posted by longage.gene at 2011-08-04 17:49:57:
建基因文库是为什么？要取基因的话，直接提取全dna后pcr不就行了？
新手，别笑，望答案

一些未知基因是不能通过PCR扩增得到的。

基因文库的概念是：一个生物体的基因组DNA用限制性内切酶部分酶切后，将酶切片段插入到载体DNA分子中，所有这些插入了基因组DNA片段的载体分子的集合体，将包含这个生物体的整个基因组，也就是构成了这个生物体的基因文库。

基因文库的用途很多，比如：
1）分离基因，特别是分离高等真核生物基因的有效手段。在基因文库中，不同的 DNA片段都分别在不同的克隆中扩增了，只要有该基因的探针存在，则从基因文库中筛选一个所需的克隆是一项比较简单的工作。此外，基因文库中被克隆的 DNA都是基因组中各种随机的顺序片段，某些 DNA片段还包括基因外部的邻近的甚至互相跨叠的序列，所以基因文库特别有利于研究天然状态下基因的顺序组织。

2）基因文库还可以应用在个体发育的研究中。例如从芽孢杆菌的正在形成芽孢的菌体中分离mRNA，并用同位素标记做成探针，用这些探针可以从芽孢杆菌的基因文库中分离出只在芽孢形成过程中活动的基因，有助于对发育过程中基因调控进行研究。

3）基因文库也可以应用在高等生物，例如人的基因定位工作中。基因文库在生产实际中也是取得所需要的基因的一种重要方法。
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5楼2011-08-04 22:28:33
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swaucq

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建基因组文库的方法在微生物领域里用处很大：
微生物分子生态领域，很多环境，如土壤，植物内生，微生物是不可培养的，但是可以直接提取总DNA，然后PCR出其保守序列如16sDNA,把这些保守序列连接载体，建立文库，这样可以拿去测序，分析代表不同菌属的保守序列的多样性。
微生物药物学领域，同样，特殊生境下，拿DNA序列比拿到微生物容易，用已知功能性状的引物去P出功能序列，在建立文库，可以方便下一步异源表达，或者，随机酶切总DNA，把片段连接载体建库，再用各自模型筛选需要的序列。
总之，现在的宏基因组概念核心就是建库，先拿到包含各自未知序列的宝藏，再有各种手段分析这里面有些什么好东西，能得到什么样的信息。
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不卑不亢
6楼2011-08-05 09:03:18
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chen.qiqi

新虫 (初入文坛)
一直有同样的困惑。
觉得构建出来的文库，应用不是很广，操作又复杂。
个人觉得：在不知道序列的情况下，只能用文库。如果该基因组全测序了，就不需要文库了。而且现在全测序越来越便宜。
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9楼2012-06-25 00:13:14
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普通回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-08-04 18:34:54
目的多为为了得到某种DNA序列，例如克隆基因，克隆16S来分析种群多样性。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-08-04 18:22:00
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cloverplm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有些特殊的序列是PCR不能得到的，比如嗜高温菌，其基因组序列本身GC含量很高，退火温度有可能是90℃+。
通过基因合成能得到序列。
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净——静——竞——进
4楼2011-08-04 22:11:51
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longage.gene

银虫 (小有名气)
1）分离基因，特别是分离高等真核生物基因的有效手段。在基因文库中，不同的 DNA片段都分别在不同的克隆中扩增了，只要有该基因的探针存在，则从基因文库中筛选一个所需的克隆是一项比较简单的工作。此外，基因文库中被克隆的 DNA都是基因组中各种随机的顺序片段，某些 DNA片段还包括基因外部的邻近的甚至互相跨叠的序列，所以基因文库特别有利于研究天然状态下基因的顺序组织。------------------------------------
1.你说的在不同的克隆中扩增是指质粒在菌中扩增吗？
2.只要有该基因的探针存在，则从基因文库中筛选一个所需的克隆是一项比较简单的工作-------为什么说容易？能保证克隆中的基因是完整的吗？
基因文库还可以应用在个体发育的研究中。例如从芽孢杆菌的正在形成芽孢的菌体中分离mRNA，并用同位素标记做成探针，用这些探针可以从芽孢杆菌的基因文库中分离出只在芽孢形成过程中活动的基因，有助于对发育过程中基因调控进行研究。------------是指不知道菌的序列的情况下这样做吗？知道了的话也没必要做文库啊。
3）基因文库也可以应用在高等生物，例如人的基因定位工作中。基因文库在生产实际中也是取得所需要的基因的一种重要方法。 ----------------------------------------------------------能不能举个例子？怎么在生产实际中？
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7楼2011-08-05 10:25:48
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longage.gene

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cloverplm at 2011-08-04 22:11:51:
还有些特殊的序列是PCR不能得到的，比如嗜高温菌，其基因组序列本身GC含量很高，退火温度有可能是90℃+。
通过基因合成能得到序列。

这和做文库有什么关系？
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8楼2011-08-05 10:29:19
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)
可以更好的了解基因DNA的功能
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10楼2012-09-12 20:20:16
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