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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮忙看下这张质粒电泳图
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[求助] 大家帮忙看下这张质粒电泳图

用生工的试剂盒提的质粒，跑出来感觉效果不是很好，超螺旋的条带不明显。是因为质粒的拷贝数比较低么？还是提取过程中破坏了质粒？大家觉得这样的质粒可以用来做后续的双酶切连接么？
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1楼 2011-07-30 14:41:18
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
liuwei78(金币+10): 2011-07-31 08:57:10
dhd997(金币+3): good 2011-07-31 17:47:56
这五个是同一个质粒么？用试剂盒提取的话确实量有些少了；
不过进行下游酶切连接都是没有问题的，你酶切载体纯化小一点的体积就可以了；
至于质粒是不是低拷贝就看你从什么菌里面了。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-07-30 15:05:17
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+3): 2011-07-31 08:59:24
虽然浓度低了点，但做后续的双酶切连接还是可以的。
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3楼2011-07-30 15:47:36
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liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-07-30 15:05:17:
这五个是同一个质粒么？用试剂盒提取的话确实量有些少了；
不过进行下游酶切连接都是没有问题的，你酶切载体纯化小一点的体积就可以了；
至于质粒是不是低拷贝就看你从什么菌里面了。。。

酶切载体纯化小一点的体积是什么意思诶？
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4楼2011-07-30 16:05:24
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2011-07-30 16:05:24:
酶切载体纯化小一点的体积是什么意思诶？

现在你提出来的质粒不是很亮，可是你后期不是要做酶切吗？酶切多切一点质粒，然后纯化的时候体积缩小，达到一个浓缩，这样质粒不是更加亮一点吗？
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5楼2011-07-30 16:41:03
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+3): 2011-07-31 09:03:30
引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2011-07-30 14:41:18:
用生工的试剂盒提的质粒，跑出来感觉效果不是很好，超螺旋的条带不明显。是因为质粒的拷贝数比较低么？还是提取过程中破坏了质粒？大家觉得这样的质粒可以用来做后续的双酶切连接么？
[eimg]7d/b8/721671_1312008 ...

没有问题的，可以做后续的双酶切连接实验，祝好运！
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6楼2011-07-30 22:04:50
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+3): 2011-07-31 08:57:29
楼上说的都对，可以做酶切酶连，
似乎是溶液PH问题，最近比较关注PH
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7楼2011-07-30 22:11:42
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保护你的大树

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+1): 2011-08-01 09:52:58
酶切连接还是可以的，我认为质粒上面的白色条带可能是蛋白或者是基因组，建议你在加去蛋白液的时候孵育下两分钟，在P3的时候尽量轻一点，而且让沉淀混匀。
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8楼2011-07-31 10:17:23
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