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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE 凝胶电泳的样品处理
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空蓝Y劫

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE 凝胶电泳的样品处理

周一跑了次电泳，SDS-PAGE，加过Buffer 了，然后过了一周老师问样品还有没，有的话再跑一次，可这时候拿出样品一看已经有明显的沉淀了。请问，该怎么处理？对电泳有什么影响没？
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1楼 2011-07-25 10:39:04
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skynoline

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

空蓝Y劫(金币+1): 5×的Buffer，上样前以4份样一份Buffer 的量加的。是上样Buffer吧？我是放4℃冰箱保存的。本来要丢的，又让跑一次 2011-07-25 13:27:35
你是怎么保存的啊，你说的Buffer是上样缓冲液不？上样缓冲液含有变性的成分。最好是电泳前再加上样缓冲液。如果带沉淀电泳的话，话出现拖尾的现象。我觉得最好是用新的蛋白再加上样缓冲液。
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2楼2011-07-25 11:34:02
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的蛋白提完后不是应该加5xbuffer 煮沸或97℃ 5 min变性后-80保存吗？WB上样前在95℃加热5秒钟然后上样。还有你咋4度保存了呢，最起码也要在-20度啊
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3楼2011-07-26 09:27:23
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励参与 2011-07-26 10:32:29
如果是标准的loading buffer 与样品混合后保存于4度的话1周之内应该不会出现你说的这种现象，如果保存到-20度的话1个月内都没有任何问题的。你找找自己的原因吧
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摒气动方息，宁神心自明。
4楼2011-07-26 09:54:29
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

空蓝Y劫(金币+1): 重新跑了一次，没有什么影响，该出的都出了，跟首次做的没什么分别。 2011-07-26 10:54:32
空蓝Y劫(金币+1): 2011-08-02 14:15:41
忘记说了，SDS遇冷会析出，如果是这种的话重新加热一下就能溶解了，不影响实验
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摒气动方息，宁神心自明。
5楼2011-07-26 09:56:10
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落满夏天

银虫 (正式写手)
最好是临用新处理。蛋白沉降了不好说。
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星星之火，可以燎原
6楼2011-08-12 13:55:46
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