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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 血浆前处理回收率低怎么办？
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ghaut

金虫 (初入文坛)

[求助] 血浆前处理回收率低怎么办？

最近刚开始做药动，做的是中药复方中的几个成分，现在面临一个很棘手的问题，回收率低。我用空白血浆加对照品这样做回收率，试过各种方法，包括液液萃取、固相萃取、甲醇沉淀蛋白，回收率最高的也就50%（PS：文献上回收率都很高的，90%以上，不知是不是我的操作有问题？）。由于灌胃的是复方，含量本来就比较低，吸收入血的含量就更低，我每个点取1mL全血，到后面几个点几乎就测不出来了，所以我还是觉得回收率是个大问题，请教各位这种情况怎么办？
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1楼 2011-07-24 13:04:19
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snowmail2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
中药2000(金币+1): 谢谢。 2011-07-24 14:38:28
回收率主要是从药物的性质入手考虑。沉淀蛋白等方法都是适用于极性比较大的药物，并且甲醇的体积也应该是血浆体积的2-3倍，否则难以完全破坏掉血浆中的蛋白质‘如果药物的极性比较低应该考虑萃取法
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沈阳药科大学药学院
2楼2011-07-24 13:13:13
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ghaut

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by snowmail2000 at 2011-07-24 13:13:13:
回收率主要是从药物的性质入手考虑。沉淀蛋白等方法都是适用于极性比较大的药物，并且甲醇的体积也应该是血浆体积的2-3倍，否则难以完全破坏掉血浆中的蛋白质‘如果药物的极性比较低应该考虑萃取法

阿魏酸应该属于极性偏大的成分呀，溶于甲醇，微溶于水。3倍量甲醇沉淀，回收率比乙酸乙酯萃取还低...
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3楼2011-07-24 13:23:54
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hulina03

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
qinhy(金币+1): 多谢应助回帖~ 2011-08-07 20:36:41
你做的是提取回收率实验，提取回收率基本都比较低，但要求大于70%才能合格，你再试试用已经提取看看，多提去几次，合并提取液。
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4楼2011-07-25 10:51:25
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snowmail2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by ghaut at 2011-07-24 13:23:54:
阿魏酸应该属于极性偏大的成分呀，溶于甲醇，微溶于水。3倍量甲醇沉淀，回收率比乙酸乙酯萃取还低...

那你用高氯酸沉淀蛋白试下，每次涡旋1分钟
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沈阳药科大学药学院
5楼2011-07-26 08:47:36
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tingzai0116

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by ghaut at 2011-07-24 13:23:54:
阿魏酸应该属于极性偏大的成分呀，溶于甲醇，微溶于水。3倍量甲醇沉淀，回收率比乙酸乙酯萃取还低...

你做的甲醇沉淀蛋白后没有吹干复溶吗？ 吹干后再用小体积甲醇复溶试试吧……！
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6楼2011-07-26 09:19:39
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ghaut

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hulina03 at 2011-07-25 10:51:25:
你做的是提取回收率实验，提取回收率基本都比较低，但要求大于70%才能合格，你再试试用已经提取看看，多提去几次，合并提取液。

乙腈做过，3倍量沉淀一次，离心以后直接测回收后率还挺高，吹干了复溶溶解的不好测出来低，可血样里浓度低，直接测太稀了。
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7楼2011-08-06 12:03:11
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ghaut

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tingzai0116 at 2011-07-26 09:19:39:
你做的甲醇沉淀蛋白后没有吹干复溶吗？ 吹干后再用小体积甲醇复溶试试吧……！

吹干以后200uL甲醇复溶的。感觉溶解的不完全，做出来结果也不高。
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8楼2011-08-06 12:04:30
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ghaut

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by snowmail2000 at 2011-07-26 08:47:36:
那你用高氯酸沉淀蛋白试下，每次涡旋1分钟

这个我还没试过，那对血样中的酸性成分用高氯酸沉淀之前还需要酸化吗？
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9楼2011-08-06 12:05:38
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caoxu1988

木虫 (正式写手)

我欲乘风归去！

【答案】应助回帖

>50%也是可以的！
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又恐琼楼玉宇！
10楼2011-08-07 09:10:43
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