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新虫 (初入文坛)

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[求助] 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上

我用简并引物扩一段未知序列，扩出来后连T载体，怎么鉴定有没有连上呢，不能用简并引物去扩吧，酶切的话不知道目的序列的酶切位点情况，只能选几个试试，但效果都不理想啊，这一时半会也不知上哪去找通用引物，怎么办呢，急！

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1楼 2011-07-21 22:42:55

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空谷幽风

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 继续鼓励 2011-07-23 01:37:56

引用回帖:

Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-22 18:33:01:
至于跑胶要多少，得取决于样品有多少，但至少在电泳的时候5纳克看起来是很清楚的。

5ng是不是能看清楚要看EB是什么时候加的以及条带的大小，如果EB是在配胶的时候加进去的，那么在跑电泳的时候，EB的泳动方向与DNA泳动方向是相反的，如果条带比较小的话，5ng的量是不容易看清楚的。mark最亮的一条带一般是20ng/ul，其余的是10ng/ul,可以自己想象一下，如果mark上样量是1ul的话，一般的带是10ng的量，最小的那条带是不是很弱？