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friya0910

新虫 (正式写手)

[求助] 表达载体构建的相关问题

现在要构建表达载体,有一些问题不是很明确,希望懂得的不吝赐教啊!
首先是双酶切表达载体和带有目的片段的T载体,一般都切多少时间啊?我看有说切过夜的,也有切几个小时的!切完以后大家都从哪些方面确定酶切完全不完全呢?
其次是连接以后除了直接转化以外,还有什么方法确定是否连接上了呢?
本人新手一个,对于这方面不是很了解,希望各位帮帮忙!
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-07-20 16:13:23
friya0910(金币+1): 2011-07-20 17:59:31
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2011-07-20 14:40:29
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空谷幽风

金虫 (正式写手)


西瓜(金币+1): 我也很好奇 2011-07-21 11:22:52
引用回帖:
Originally posted by 千king寻 at 2011-07-20 14:04:28:
双酶切37度水浴2——3个小时,之后琼脂糖凝胶电泳观察条带,若条带正确则切胶回收,此时回收的为带有两个酶切位点的目的片段。该目的片段与已经带有该酶切位点的载体进行连接,若用T4连接酶,则需16度金属浴过夜连 ...

金属浴是什么?可以在水浴锅中或者直接在PCR仪上啊
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
9楼2011-07-20 21:12:08
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