| 查看: 1483 | 回复: 14 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
青菜小虫银虫 (著名写手)
风居住的街道
|
[求助]
构建全长cDNA中连接的问题
|
||
|
各位朋友： 我现在要构建全长的cDNA，全长是15186bp，分为12个目的片段。分别连在T载体上了。设计了一系列的酶切连接方案，要连到 PMC18 质粒上，这是一个低拷贝的质粒。现今T载体上和PMC18 上各连了3个目的片段，另外一个PMC18 连接了2个目的片段，可之后的连接之路依旧很艰难。请求朋友们给点好的连接方法，想法。多谢！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
blackrose8089» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有285人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用clontech的SMART建cDNA文库，连接转化不成功，求助！！急死了！！！
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于建立cDNA文库的诸多问题，拜请解答
已经有11人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】求助如何获得cDNA片段的全长？
已经有9人回复
青菜小虫
银虫 (著名写手)
风居住的街道
- MolEPI: 5
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1666.5
- 散金: 1249
- 红花: 29
- 帖子: 1111
- 在线: 352.2小时
- 虫号: 1332002
- 注册: 2011-06-27
- 性别: MM
- 专业: 病毒学
我还是新虫啊，我都是铜虫了哇。
3楼2011-07-09 14:21:52
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
 帮顶！很活跃的小虫，继续努力哦！3.1新虫 考虑到对新虫的鼓励和照顾，当前金币小于50，或者注册日期不超过1个月的虫友列为新虫。其他均不在新虫照顾之列。对新虫的处罚从轻，奖励从重。 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2994095 |
2楼2011-07-09 12:24:23
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
青菜小虫(金币+2): 我就是这么做的啊，我现在有3个同步的质粒，顺序就是1234,7896,101112分别连。我的困惑是现在目的片段往每一个质粒上连接都很艰难，连不上了。 2011-07-09 16:08:16
dhd997(金币+2): good 2011-07-09 18:17:38
青菜小虫(金币+1): 谢谢帮助。 2011-07-11 14:15:50
西瓜(金币+2): Good!补上EPI！ 2011-07-13 22:52:38
西瓜(EPI+1): 连楼下一起 2011-07-15 17:46:13
青菜小虫(金币+2): 我就是这么做的啊，我现在有3个同步的质粒，顺序就是1234,7896,101112分别连。我的困惑是现在目的片段往每一个质粒上连接都很艰难，连不上了。 2011-07-09 16:08:16
dhd997(金币+2): good 2011-07-09 18:17:38
青菜小虫(金币+1): 谢谢帮助。 2011-07-11 14:15:50
西瓜(金币+2): Good!补上EPI！ 2011-07-13 22:52:38
西瓜(EPI+1): 连楼下一起 2011-07-15 17:46:13
| 把12个片段尽量按顺序分成3-4组同时去连载体，如果酶切位点设计的足够合理的话不按顺序也没什么问题。等这3-4个都验证正确后再互连。 |
4楼2011-07-09 15:52:53
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2011-07-14 17:13:03
