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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

[求助] 求助DNA提取方法

本人最近用微波法提细菌DNA,提了几天都毫无结果,想问一下大虾们有什么好的方法,我提DNA主要是用于16rDNA扩增,然后进行测序鉴定菌种的
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


1949stone(金币+1): 在楼上修改了 2011-07-05 19:43:02
(5) 收集上清液,用等体积苯酚/氯仿抽提,12000rpm离心10min;
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-07-05 19:09:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-07-05 19:17:12
1949stone:编辑内容 2011-07-05 19:42
1949stone:编辑内容 2011-07-05 19:43
追梦的人1987(金币+1): 2011-07-05 22:20:20
2.10.1.1染色体总DNA少量提取
(1) 取过夜培养菌液1.5ml于2.0ml EP管中,9000rpm离心2min,弃上清,收集菌体,吸干水分;
(2) 对G+菌株加100g/ml溶菌酶50l,30℃处理1h;
(3) 裂解:向每管加200l裂解缓冲液(40mmol/L Tris-HCl,20mmol/L 乙酸钠,1mol/L EDTA,1% SDS,pH8.0),迅速剧烈抽吸悬浮菌体,使其裂解;
(4) 加入66l 5mol/L NaCl,充分混匀,12000rpm离心10min,沉淀蛋白及细胞壁;
(5) 收集上清液,用等体积苯酚/氯仿抽提,12000rpm离心10min
(6) 收集上清液,加入与上清液等体积的氯仿:异戊醇(24:1),混匀,12000 rpm离心10 min;
(7) 取上清液加入2倍体积无水乙醇,温和颠倒,13000 rpm离心15 min;
(8) 弃上清,沉淀物用1ml 75%的乙醇冲洗2-3次,真空干燥器干燥总DNA沉淀;
(9) 基因组DNA沉淀用30 μl TE 或ddH2O溶解。并进行琼脂糖核酸电泳,检验大小及浓度,-20℃储存。

[ Last edited by 1949stone on 2011-7-5 at 19:43 ]
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-05 19:03:10
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-05 19:03:10:
2.10.1.1染色体总DNA少量提取
(1) 取过夜培养菌液1.5ml于2.0ml EP管中,9000rpm离心2min,弃上清,收集菌体,吸干水分;
(2) 对G+菌株加100g/ml溶菌酶50l,30℃处理1h;
(3) 裂解:向每 ...

我想问一下第五步是什么意思啊
4楼2011-07-05 22:22:07
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

蛋白质不能一步就去除完的
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-07-05 22:44:36
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