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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC梯度洗脱，总出现很强的一个峰怎么回事？
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jinglh8288

木虫 (正式写手)

[求助] HPLC梯度洗脱，总出现很强的一个峰怎么回事？

实验室新买了一台快速色谱，用的是2.1*50的XDB-C18的色谱柱，0.25mL/min的流速，自动进样器进样，乙腈水为流动相，梯度条件是50%B运行4min,线性梯度，10min时乙腈增加到100%，并维持10min,结果不论是运行样品还是只走流动相，还是进甲醇，在大概14min都会出现一个很强的峰，而且基线漂移，同时监测压力可以看到在大约13min到14min之间压力会从大约135bar降到90bar左右，随后采集的信号和压力基本都为直线……请问这到底是怎么回事呢？进样前，色谱柱已经充分平衡好了！很急，谢谢大家的帮助！
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一分耕耘，一分收获。
1楼 2011-07-05 11:54:29
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jinglh8288

木虫 (正式写手)
急切得到大家的帮助，谢谢！在线等……
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一分耕耘，一分收获。
2楼2011-07-05 11:55:22
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
opq691(金币+1): O(∩_∩)O谢谢 2011-07-05 22:02:17
本帖仅楼主可见
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3楼2011-07-05 12:02:20
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ztagri

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

jinglh8288(金币+2): 哇哈哈水回有影响？峰远远大于我的样品峰啊！谢谢 2011-07-05 12:18:13
水，如果是娃哈哈，基本会有峰。仪器不同，峰高不一样，后来买了超纯水基本上基线没出过问题。
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4楼2011-07-05 12:07:49
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hntiger

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

jinglh8288(金币+2): 谢谢！ 2011-07-05 12:19:26
1：请问你测了设备及系统的梯度延迟体积了吗？
2：更换其它色谱柱还出现同样问题吗？
3：如果方法是你开发的，请您稍微修改梯度条件后，再进样还出现同样问题？
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5楼2011-07-05 12:08:14
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jinglh8288

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by echo1505 at 2011-07-05 12:02:20:
你的乙腈是国产的还是进口的，一般国产的色谱级流动相，不建议走梯度，换成进口的试试

进口的，霍尼韦尔的
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一分耕耘，一分收获。
6楼2011-07-05 12:16:57
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jinglh8288

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hntiger at 2011-07-05 12:08:14:
1：请问你测了设备及系统的梯度延迟体积了吗？
2：更换其它色谱柱还出现同样问题吗？
3：如果方法是你开发的，请您稍微修改梯度条件后，再进样还出现同样问题？

1、没有测过，请问如何测量梯度延迟体积？不同的梯度是不是不一样？这个有什么影响呢，我不太清楚。
2、没有试过其他的色谱柱
3、方法是我开发的，更改梯度条件后有同样的问题，只不过位置不同而已
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一分耕耘，一分收获。
7楼2011-07-05 12:21:13
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linhl666

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

很强的一个峰有多强？如果峰高超过5个单位，我想原因如下：
1.甲醇或水的质量太差；
2.柱子或者系统中有未冲洗干净的杂志存在；
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8楼2011-07-05 12:22:28
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jinglh8288

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by linhl666 at 2011-07-05 12:22:28:
很强的一个峰有多强？如果峰高超过5个单位，我想原因如下：
1.甲醇或水的质量太差；
2.柱子或者系统中有未冲洗干净的杂志存在；

254nm时有几百，220nm时3000-5000，210nm时平头……
重复进样总是出现同样的结果……
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一分耕耘，一分收获。
9楼2011-07-05 12:24:09
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wxlgy1984

新虫 (小有名气)
★
opq691(金币+1): O(∩_∩)O谢谢 2011-07-05 22:02:42
检查一下流速设置哦
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10楼2011-07-05 19:23:35
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