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westlover

银虫 (著名写手)

[求助] 白鼠骨髓细胞培养的一个问题,棘手!

从四周雌性白鼠胫骨中取得细胞,培养6天后显微镜下观察饱和度为70-80%,大部分贴壁完好,有少量圆形、悬浮细胞。更换培养培养液时,先用PBS冲洗2次然后加入新鲜培养液,重新放到显微镜下观察时发现:90%的细胞变成圆形,而且几乎从培养皿底部脱离,而且细胞数目比换培养液前少了很多。
这时什么原因呢?
本打算明天接种细胞到试样上,看来不行了!
有类似经历的虫友吗?
可以保证PBS和培养液没有问题。
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黄昏过客

金虫 (正式写手)


lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-07-05 11:05:20
培养到六天才换液的?估计是分泌物过多,细胞贴壁不是很好吧,一洗就下来了,猜测哈,小虾米期待大侠的解答
从小与世抗争,无奈轮回难过
2楼2011-07-04 15:12:43
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westlover

银虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 黄昏过客 at 2011-07-04 15:12:43:
培养到六天才换液的?估计是分泌物过多,细胞贴壁不是很好吧,一洗就下来了,猜测哈,小虾米期待大侠的解答

sorry,忘了说了,3天的时候也换过一次,当时也是细胞都浮起来了。
3楼2011-07-04 16:36:12
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黄昏过客

金虫 (正式写手)


lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-07-05 11:05:40
引用回帖:
Originally posted by westlover at 2011-07-04 16:36:12:
sorry,忘了说了,3天的时候也换过一次,当时也是细胞都浮起来了。

如果那样的话,个人觉得那应该是细胞的问题,细胞贴壁效果不好。
从小与世抗争,无奈轮回难过
4楼2011-07-04 17:04:59
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jingwang7793

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-07-05 11:05:29
骨髓中细胞种类很多,要清楚你得到的是那种细胞。
JingWang
5楼2011-07-05 04:47:34
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westlover

银虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by jingwang7793 at 2011-07-05 04:47:34:
骨髓中细胞种类很多,要清楚你得到的是那种细胞。

对此我也不甚了了,培养液中没有添加分化诱导药物,师兄说,换过几次培养液后,悬浮细胞基本会被清洗出去,贴壁的细胞就会是造骨细胞,我也不清楚……
6楼2011-07-05 08:47:52
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westlover

银虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 黄昏过客 at 2011-07-04 17:04:59:
如果那样的话,个人觉得那应该是细胞的问题,细胞贴壁效果不好。

是吗?可是别人从骨髓细胞里得出的贴壁细胞贴壁很好啊,换培养液的时候并不会从培养皿底部脱离。还能测试3小时附着率,3小时细胞形态等等,如果我的细胞贴壁不好,3小时后就算在试样表面铺展的很好,也会被PBS冲洗掉的吧?那就太郁闷了!今天是培养的第七天,应该接种了,也不知道是不是好些了。
7楼2011-07-05 08:51:56
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westlover

银虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 黄昏过客 at 2011-07-04 17:04:59:
如果那样的话,个人觉得那应该是细胞的问题,细胞贴壁效果不好。

今天打算给它传代一下,看看细胞在新的培养皿中能不能牢固贴壁,那样,种植的时候骨髓细胞就是第二代了,唉,不完美,文献中都是培养七天后直接种植。
8楼2011-07-05 08:56:55
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bonesc12

新虫 (初入文坛)

你好,有做和骨有关的研究吗?你是否有机会申请到国家公派的名额?我们美国这边有个国内访问学者或博士生联合培养的位置。如果感兴趣请和我联系。Email: fengdj100@hotmail.com 谢谢。德江
9楼2012-07-29 22:43:40
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westlover

银虫 (著名写手)

谢谢啦,真心地。我现在在日本是公派的读博,做的是骨内植入钛合金表面处理,明年7月毕业呢。希望到时候你那边的职位还在。对了,似乎那个职位不提供奖学金吧?
10楼2012-07-30 07:50:21
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