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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 综合其他 » 白鼠骨髓细胞培养的一个问题，棘手！
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westlover

银虫 (著名写手)

[求助] 白鼠骨髓细胞培养的一个问题，棘手！

从四周雌性白鼠胫骨中取得细胞，培养6天后显微镜下观察饱和度为70-80%，大部分贴壁完好，有少量圆形、悬浮细胞。更换培养培养液时，先用PBS冲洗2次然后加入新鲜培养液，重新放到显微镜下观察时发现：90%的细胞变成圆形，而且几乎从培养皿底部脱离，而且细胞数目比换培养液前少了很多。
这时什么原因呢？
本打算明天接种细胞到试样上，看来不行了！
有类似经历的虫友吗？
可以保证PBS和培养液没有问题。
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1楼 2011-07-04 13:57:07
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 黄昏过客 at 2011-07-04 15:12:43:
培养到六天才换液的？估计是分泌物过多，细胞贴壁不是很好吧，一洗就下来了，猜测哈，小虾米期待大侠的解答

sorry，忘了说了，3天的时候也换过一次，当时也是细胞都浮起来了。
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3楼2011-07-04 16:36:12
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by jingwang7793 at 2011-07-05 04:47:34:
骨髓中细胞种类很多，要清楚你得到的是那种细胞。

对此我也不甚了了，培养液中没有添加分化诱导药物，师兄说，换过几次培养液后，悬浮细胞基本会被清洗出去，贴壁的细胞就会是造骨细胞，我也不清楚……
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6楼2011-07-05 08:47:52
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 黄昏过客 at 2011-07-04 17:04:59:
如果那样的话，个人觉得那应该是细胞的问题，细胞贴壁效果不好。

是吗？可是别人从骨髓细胞里得出的贴壁细胞贴壁很好啊，换培养液的时候并不会从培养皿底部脱离。还能测试3小时附着率，3小时细胞形态等等，如果我的细胞贴壁不好，3小时后就算在试样表面铺展的很好，也会被PBS冲洗掉的吧？那就太郁闷了！今天是培养的第七天，应该接种了，也不知道是不是好些了。
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7楼2011-07-05 08:51:56
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 黄昏过客 at 2011-07-04 17:04:59:
如果那样的话，个人觉得那应该是细胞的问题，细胞贴壁效果不好。

今天打算给它传代一下，看看细胞在新的培养皿中能不能牢固贴壁，那样，种植的时候骨髓细胞就是第二代了，唉，不完美，文献中都是培养七天后直接种植。
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8楼2011-07-05 08:56:55
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westlover

银虫 (著名写手)
谢谢啦，真心地。我现在在日本是公派的读博，做的是骨内植入钛合金表面处理，明年7月毕业呢。希望到时候你那边的职位还在。对了，似乎那个职位不提供奖学金吧？
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10楼2012-07-30 07:50:21
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