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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

[交流] 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教已有14人参与

昨晚镍柱纯化两个蛋白（脂肪酶），上样量为20ml镍柱纯化1L菌液破碎上清（80ml），最后用50ml  500mM咪唑（50mM Tris·Hcl，0.5mM Nacl，10%甘油  ）洗脱，透析：（1）50mM Tris·Hcl，0.2mM Nacl  3L 透析3h，开始出现沉淀；（2）50mM Tris·Hcl，0.03mM Nacl，3L透析不到1h，就出现比较多的沉淀了，7h后出现大量沉淀。透析一直在4℃下搅拌进行。请教各位高手，是我蛋白变性太快了还是透析过程中什么因素引起的，谢谢
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jinpeng_6118

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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
1楼2011-06-30 10:31:09
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zonegirlcool

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
不知道你的破菌液和平衡液是否一致，破菌液和平衡液都加0.5的NACL应该不影响，洗脱时用你下一步的盐浓度就可以，透析是为了除去什么呢，洗脱时咪唑不用那么高浓度，我没做过酶，我的蛋白只是去咪唑，超滤脱盐都可以。

[ Last edited by zonegirlcool on 2011-7-7 at 09:35 ]
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14楼2011-07-07 09:34:17
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