应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western和PCR选择问题
51/1返回列表
查看: 2175  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

瘪

金虫 (小有名气)

[求助] western和PCR选择问题

做细胞凋亡的实验，想测定caspase-3,9蛋白，想问下是用半定量PCR还是western对其进行测定比较好？是不是都是说明凋亡问题，哪个更好一点，还是其中一个用PCR另一个用western？请详细说明一下二者的区别，测定后分别能说明的问题！新手请教高手帮忙！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-29 16:03:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 瘪 at 2011-06-30 10:12:15:
谢谢，我现在在设计我的试验方法，就是想让方法更丰富一些，想从线粒体凋亡途径说明凋亡，所以会检测caspase家族蛋白，你说的双染这个我也做，还有TUNEL，这两个我会选其中一个做。我看好多文章都做了caspase或 ...

mitochondrial apoptotic pathway的话你可以检测cytochrome c release，也是用western，这个数据比较坚挺的~
赞一下 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
6楼2011-06-30 12:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 2011-06-30 07:42:45
瘪(金币+2): 2011-06-30 19:18:32
Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。

一般检测凋亡要有pro-caspase3（32KD）减少的趋势，活化caspase3（17KD）增加的趋势。这是指western
PCR 需要做一下的，但是结果不一定和western的一致。因为caspase的变化主要是蛋白的活化。

caspase9 买相应抗体即可
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-30 06:57:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

瘪(金币+3): 2011-06-30 19:18:27
检测凋亡的话用PCR没用，mRNA水平的变化不能直接联系到凋亡水平上。你需要做更直接的检测，比如LS说的caspase3 cleavage实验。
除此之外，还有很多其他手段检测细胞凋亡。
比如roche的 Cell death Elisa 试剂盒
酶学检测来测定caspase 3 activity（这个也有专门的试剂盒）
或者更直接点用凋亡敏感的染料直接染细胞 如PI、ANNEXIN V等，直接镜检或者上流式细胞仪都可以。
现在的文章中比较主流的数据都是一些试剂盒或者是流式的数据。这些比较可信。
赞一下 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
3楼2011-06-30 07:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瘪

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-06-30 06:57:30:
Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和 ...

谢谢，我现在是实验设计阶段，主要是想丰富下实验方法，想从线粒体途径检测细胞凋亡，因为还有一年毕业，所以试验量是已经够多了，像三楼说的双染我也做，我想问下，我用caspase-3，9活性试剂盒测下他的活性，和用western测定这两个蛋白有差么？是不是western更有说服力，还是说明的结果和问题都是一样的就没所谓采用哪种方法呢?
赞一下 回复此楼
4楼2011-06-30 10:05:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭