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瘪

金虫 (小有名气)

[求助] western和PCR选择问题

做细胞凋亡的实验，想测定caspase-3,9蛋白，想问下是用半定量PCR还是western对其进行测定比较好？是不是都是说明凋亡问题，哪个更好一点，还是其中一个用PCR另一个用western？请详细说明一下二者的区别，测定后分别能说明的问题！新手请教高手帮忙！！
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1楼 2011-06-29 16:03:44
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

瘪(金币+3): 2011-06-30 19:18:27
检测凋亡的话用PCR没用，mRNA水平的变化不能直接联系到凋亡水平上。你需要做更直接的检测，比如LS说的caspase3 cleavage实验。
除此之外，还有很多其他手段检测细胞凋亡。
比如roche的 Cell death Elisa 试剂盒
酶学检测来测定caspase 3 activity（这个也有专门的试剂盒）
或者更直接点用凋亡敏感的染料直接染细胞 如PI、ANNEXIN V等，直接镜检或者上流式细胞仪都可以。
现在的文章中比较主流的数据都是一些试剂盒或者是流式的数据。这些比较可信。
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摒气动方息，宁神心自明。
3楼2011-06-30 07:45:01
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by 瘪 at 2011-06-30 10:12:15:
谢谢，我现在在设计我的试验方法，就是想让方法更丰富一些，想从线粒体凋亡途径说明凋亡，所以会检测caspase家族蛋白，你说的双染这个我也做，还有TUNEL，这两个我会选其中一个做。我看好多文章都做了caspase或 ...

mitochondrial apoptotic pathway的话你可以检测cytochrome c release，也是用western，这个数据比较坚挺的~
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摒气动方息，宁神心自明。
6楼2011-06-30 12:09:35
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