应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » puf酶与普通Taq酶混用PCR问题
52/1返回列表
查看: 4929  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] puf酶与普通Taq酶混用PCR问题

之前用普通Taq酶做的PCR，目的条带比较单一而且很亮，因为要做A/T克隆测序，担心普通Taq酶会导致突变，所以将puf与Taq按1:2混合使用，结果P不出来。请问各位高手，我该作何调整？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-06-29 10:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
可以混用，我们一起这么用，没什么大问题啊
赞一下 回复此楼
17楼2011-07-14 11:13:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

liucong046

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-29 19:03:37
mahoumeimei(金币+2): 谢谢 2011-07-01 10:59:16
我没有将两种酶混合液用过，我想这样肯定有问题。takara公司的pfu是平末端的，我给你个建议，你可以试试全式金公司的HIFI酶。是高保真的而且也可以直接用于A/T克隆！！祝你好运！
赞一下(1人) 回复此楼
微生物分子生物学
2楼2011-06-29 10:47:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-29 19:03:45
P不出来不好说，但是如果做T/A克隆到话，加Pfu酶不行啊。Pfu酶有3'至5'的外切酶活性（校正功能的来源），会把产物末端的A切掉的，做不了T/A克隆。
T/A克隆接触不多，等高人解答吧
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-29 10:52:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 这个貌似有点险 2011-06-29 19:04:11
引用回帖:
Originally posted by mahoumeimei at 2011-06-29 10:40:53:
之前用普通Taq酶做的PCR，目的条带比较单一而且很亮，因为要做A/T克隆测序，担心普通Taq酶会导致突变，所以将puf与Taq按1:2混合使用，结果P不出来。请问各位高手，我该作何调整？
[eimg]66/e7/1258265_1309315315 ...

用个高保真酶就是了，高保真酶扩增的速度会比普通酶的稍慢点，但是没必要那么急嘛，就让它扩增去好了，混合是可以的，比例哇要你自己去discovery~你设置几个比例试试看哇~应该有扩增出来的，对了，你扩增的片段是不是很长( ⊙o⊙ )哇~
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-29 10:57:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 09:35 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 XJXMuRjD7cK7 2026-11-13 3/150 2026-11-15 05:44 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-13 3/150 2026-11-15 05:11 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 03:43 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 7/350 2026-11-14 22:44 by Equinoxhua
[考博] 27博士 +6 锦鲤送福至 2026-11-10 6/300 2026-11-14 21:23 by xupeii
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 5/250 2026-11-13 11:15 by Equinoxhua
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 16:55 by zzy933268
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:48 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 6/300 2026-11-12 12:42 by ECLTXnJnRSXf
[基金申请] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:36 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 8/400 2026-11-12 04:57 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭